舒洛地特對糖尿病大鼠腎小球細胞外基質積聚的影響及其機制研究.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病患者嚴重的并發(fā)癥，也是終末期腎功能衰竭最常見的病因。但是目前糖尿病腎病尚無有效的治療方法，因此，尋找糖尿病腎病的有效治療途徑，一直是腎臟病領域亟待解決的重要課題。既往研究證實，舒洛地特可以降低糖尿病腎病的尿蛋白，對腎臟起到保護作用，但舒洛地特的腎臟保護機制僅存在幾種假說，確切機制不明。糖尿病腎病主要病理變化包括腎小球肥大，腎小球細胞外基質積聚，腎小球基底膜增厚和腎小球硬化。其中腎小球細胞外基質積聚在腎小球硬化的發(fā)生、發(fā)

2、展中起著至關重要的作用。那么，舒洛地特是否能通過抑制腎小球細胞外基質積聚而起到腎臟保護作用，目前尚未見相關報道。因此，我們建立糖尿病大鼠模型，然后在此基礎上研究舒洛地特對糖尿病大鼠腎小球細胞外基質積聚的影響，并探討其分子機制。
　　目的：建立2型糖尿病大鼠模型，觀察舒洛地特對糖尿病大鼠腎損害的保護作用及對腎小球細胞外基質積聚的影響，初步探討舒洛地特抑制糖尿病大鼠腎小球細胞外基質積聚的分子機制。
　　方法：首先從SD大鼠中隨機

3、取出10只，設為正常對照組(C組)。其余50只大鼠予以高脂、高糖飼料喂養(yǎng)1個月后，腹腔注射鏈脲佐菌素造模。將造模成功的40只大鼠隨機分為糖尿病模型組(DM組)、不同劑量的舒洛地特治療組(DMS1組、DMS2組)和替米沙坦治療組(DMT組)，分別給予5mg/kg/d、10mg/kg/d舒洛地特肌肉注射和5mg/kg/d替米沙坦水溶液灌胃治療。治療8周后觀察24h尿白蛋白定量、腎臟肥大指數、血糖、糖化血紅蛋白、血尿素氮及血肌酐的變化；光鏡及

4、電鏡下觀察腎組織病理學改變；并通過免疫組織化學法及Westernblot觀察腎組織中轉化生長因子-β1(TGF-β1)、結締組織生長因子(CTGF)、基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)、基質金屬蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)表達的變化。
　　結果：
　　1．實驗室檢測：治療結束時(8周)，大鼠24h尿白蛋白定量、腎臟肥大指數在DM組顯著升高(P<0.01)，各治療組顯著下降，其中以DMS2組和DMT組下降最為顯著(P<0.

5、05或P<0.01)，但仍高于C組，而二者之間相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。大鼠血糖、糖化血紅蛋白水平在DM組顯著升高(P<0.01)；各治療組無明顯下降(P>0.05)。各組大鼠血尿素氮水平均無明顯升高(P>0.05)。大鼠血肌酐水平在DM組顯著升高(P<0.01)；各治療組血肌酐升高幅度低于DM組升高幅度，但差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2．在光鏡下，C組大鼠腎小球結構完整，未見腎小球增大及異常改變。DM組

6、大鼠腎小球增大，系膜細胞、基質增生，系膜區(qū)增寬，毛細血管壁增厚。各治療組腎組織的病理改變較DM組均有不同程度的減輕，其中以DMS2組、DMT組上述病變減輕明顯。治療8周時，大鼠腎小球面積、腎小球細胞外基質面積在DM組顯著增加(P<0.01)；各治療組顯著減少(P<0.01)，其中以DMS2組、DMT組減少最為顯著(P<0.05)，而二者之間相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。電鏡下DM組可見腎小球基底膜彌漫或局限性增厚，系膜區(qū)增寬，足

7、突融合、消失。各治療組腎組織的病理變化較DM組均有不同程度的減輕，其中以DMS2組和DMT組上述病變減輕明顯。
　　3．免疫組織化學染色結果顯示，治療結束時，大鼠腎組織中TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1陽性面積比值在DM組明顯增加，各治療組明顯減少，尤其TGF-β1、CTGF、TIMP-1在DMS2組和DMT組減少更為顯著，但仍低于C組(P<0.01或P<0.05)；MMP-9陽性面積比值在各治療組間差異無統(tǒng)計學意

8、義(P>0.05)。MMP-9/TIMP-1的比值在DM組明顯減少，各治療組明顯升高，尤其在DMS2組和DMT組升高更顯著，但仍低于C組(P<0.01)。
　　4．Western blot結果顯示，治療結束時，大鼠腎組織中TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1在DM組表達明顯增加，各治療組表達明顯減少，尤其TGF-β1、CTGF、TIMP-1在DMS2組和DMT組表達減少更為顯著，但仍低于C組(P<0.01)；MMP-9

9、的表達在各治療組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MMP-9/TIMP-1的比值在DM組明顯減少，各治療組明顯升高，尤其在DMS2組和DMT組升高更顯著，但仍低于C組(P<0.01或P<0.05)。
　　結論：
　　1．舒洛地特可以降低糖尿病大鼠尿中白蛋白排泄量，并呈現一定的量效關系，對腎臟具有保護作用，但這種腎臟保護作用與降低血糖無關。
　　2.舒洛地特可以降低糖尿病大鼠腎臟肥大指數，并減輕腎小球系膜區(qū)增寬、基底膜