前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子(PBEF)在缺氧-復(fù)氧內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:建立缺氧/復(fù)氧模型，檢測(cè)缺氧/復(fù)氧后內(nèi)皮細(xì)胞中PBEF(pre-B-cellcolony-enhancing factor，前B細(xì)胞克隆增強(qiáng)因子)的蛋白表達(dá)變化，通過(guò)RNA干擾沉默PBEF基因探討PBEF與VEGF(Vascular endothelial growth factor，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子)和（Phosphorylation-myosin light chain kinase，磷酸化的肌球蛋白輕鏈）的關(guān)系，研究PB

2、EF在缺氧/復(fù)氧后內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的機(jī)制。
　　方法:1、根據(jù)文獻(xiàn)合成PBEFsiRNA, HUVEC根據(jù)處理的不同分為空脂質(zhì)體對(duì)照組、陰性對(duì)照組和PBEFsiRNA組，通過(guò)RT-PCR和western blot分別在基因水平和蛋白水平檢測(cè)PBEF的表達(dá)情況。
　　2、建立內(nèi)皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧模型，根據(jù)對(duì)HUVEC處理的不同將實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、缺氧（20小時(shí)）/復(fù)氧（3小時(shí)）組、缺氧（20小時(shí)）/復(fù)氧（6小時(shí)）組、缺氧（2

3、0小時(shí)）/復(fù)氧（9小時(shí)）組、缺氧（20小時(shí)）/復(fù)氧（12小時(shí)）;Westernblot檢測(cè)PBEF的蛋白表達(dá)情況。
　　3、根據(jù)對(duì)HUVEC處理的不同將實(shí)驗(yàn)分為:Ⅰ組（缺氧/復(fù)氧+空脂質(zhì)體對(duì)照組），Ⅱ組（缺氧/復(fù)氧+陰性對(duì)照組），Ⅲ組（缺氧/復(fù)氧+PBEFsiRNA組）、Ⅳ組（空脂質(zhì)體對(duì)照組），western blot檢測(cè)VEGF和p-MLC的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1、PBEFsiRNA干擾PBEF的mRNA和蛋白表達(dá)水平與

4、脂質(zhì)體對(duì)照、陰性對(duì)照相比明顯下調(diào)(P＜0.05);陰性對(duì)照組和脂質(zhì)體對(duì)照組之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、與正常對(duì)照組相比缺氧/復(fù)氧組PBEF蛋白表達(dá)明顯增加，復(fù)氧3h開(kāi)始升高，9h達(dá)峰值，持續(xù)到12h后開(kāi)始下降。(P＜0.05)
　　3、對(duì)HUVEC進(jìn)行缺氧/復(fù)氧和RNA干擾后，Ⅰ組和Ⅱ組與Ⅳ組相比VEGF、p-MLC表達(dá)明顯升高(P＜0.05);Ⅲ組與Ⅰ組和Ⅱ組相比VEGF、p-MLC表達(dá)明顯下降(P＜0