晚期氧化蛋白產物與NADPH氧化酶途徑在膜性腎病大鼠發(fā)病機制中的初步研究.pdf

1、目的:探討在C-BSA誘導的膜性腎病大鼠發(fā)病過程中，晚期氧化蛋白的產生情況及其對MN大鼠腎組織損傷機制的初步探索。
　　方法:將80只SD雄性大鼠隨機分成正常組（A組）、模型組（B組）、模型+夾竹桃麻素組(C組)、夾竹桃麻素組（D組），每組20只;B、C組按改良的Border法[1]予以造模，C、D組在正式免疫時即開始予以夾竹桃麻素200 mg/kg.d灌胃，正常組予以相應的生理鹽水刺激。于正式免疫第1、2、3、4周末，各組各隨機

2、選取5只大鼠處死，處死前一天收集24小時尿行24hUTP及Elisa檢測法檢測尿中AOPP、PCX水平;心臟采血離心上清液行ALB、BUN、Scr、TC、TG檢測及Elisa法檢測血清中AOPP水平、分光光度法檢測血清中MDA、SOD的表達水平;取腎組織皮質部分約2×3 mm用生理鹽水浸濕紗布包裹，予以OCT試劑包埋后立即冰凍切片，行免疫熒光染色，熒光顯微鏡置于暗室中觀察免疫復合物沉積情況，左腎予以固定、脫水、包埋等過程制成蠟塊，再行石

3、蠟切片，行HE、Masson及PSAM染色，光學顯微鏡觀察病理改變情況，剩余腎組織凍存于-80℃冰箱備檢，Elisa法檢測腎組織中AOPP、ROS水平、免疫組化檢測WT-1表達水平。各個檢測指標在同一時間點，各組間行獨立樣本的單因素方差分析，P≤0.05為差異有顯著意義，指標間的相關性行Person相關性分析。
　　結果:(1)腎臟形態(tài)改變A、D組各時間點腎臟顏色、形態(tài)正常，腎組織無明顯病理改變，也無IgG熒光沉積;B、C組于第1

4、周末顏色及形態(tài)未見明顯異常，但隨著造模時間的延長多數腎臟可見體積增大、顏色變蒼白，呈“大白腎”樣改變，隨著造模時間的延長，逐漸可見基底膜彌漫性增厚，部分囊腔狹窄，嗜復紅物沉積，綢帶樣改變，“雙軌癥”及“釘突”形成等改變，上述病理改變C組較B組輕微;免疫熒光染色在B、C兩組第1周末就可見明顯的顆粒沉積，熒光強度+++-++++，隨著造模時間的延長未見明顯增強，且兩組間熒光強度無明顯差異。(2)臨床指標的變化A、D兩組各時間點24hUTP、

5、ALB、BUN、Scr、TC、TG都無明顯差別;B、C兩組24hUTP從第1周開始就明顯高于A、D組，直至第4周末B、C組持續(xù)升高，但C組較B組低;B、C組ALB從第2周末開始下降，B組較C組更低;在第4周末，與A、D組比，B、C組BUN、Scr、TC、TG水平都有明顯升高，與B組比較，C組可見BUN水平明顯下降，但Scr、TC、TG都未見明顯下降。(3)血清中AOPP、SOD、MDA的動態(tài)表達各指標在A、D組隨著造模時間延長未見明顯增

6、減，兩組間的表達水平也無明顯差異;B組血清中AOPP、MDA、SOD的平均值水平在各個時間點均高于A、D兩組，AOPP、MDA的水平呈上升趨勢，SOD水平隨著造模時間的延長呈下降趨勢，AOPP、SOD從第1周末起與A、D組的差異有統(tǒng)計學意義（P≤0.05），MDA從第2周末起與A、D組的差異有統(tǒng)計學意義(P≤0.05);C組血清中AOPP、SOD及MDA平均值水平在各個時間點均大于A、D兩組，但小于B組的表達水平，AOPP至第4周末與B

7、組的差異有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)，MDA從第3周末開始兩組間差異既有統(tǒng)計學意義(P≤0.05)，而SOD在各個時間點的差異不明顯。(4)尿液中AOPP、PCX的動態(tài)表達A、D組在各個時間點AOPP、PCX水平無顯著變化，兩組之間無明顯差異;B、C組尿液中AOPP的水平明顯較A、D兩組升高(P≤0.05)，且在B組中呈上升趨勢，C組表達水平平均值在各時間點均小于B組，但差異不明顯;B、C組尿液中PCX的表達水平在第1、2周呈上升趨勢，

8、且明顯高于A、D組，至第3、4周的表達水平較前兩周下降，C組PCX水平在前3周明顯低于B組(P≤0.05)，在第4周末差異不明顯。(5)腎組織中AOPP、ROS、WT-1的動態(tài)變化A、D組腎組織AOPP、ROS、WT-1的表達在各個時間點無顯著變化，且兩組之間無明顯差異;B、C組AOPP、ROS的表達水平呈上升趨勢，從第2周末開始明顯高于A、D組，C組AOPP水平除第2周明顯低于B外，其余時間點差異不明顯，而C組ROS水平從第2周末開始

9、明顯低于B組（P≤0.05）;B、C組中WT-1半定量水平明顯低于A、D兩組（P＜0.05），且呈下降趨勢，但C組表達水平較B組高。(6)模型組血清、尿液中AOPP的表達水平的比較AOPP在血清、尿液中的表達水平呈時間依賴性增高;尿液中AOPP均值水平高于血清中的表達水平，前3周差異特別明顯（P≤0.05），至第4周末差異不明顯。(7)各指標的相關性分析血清中AOPP與MDA呈正相關，與SOD呈負相關;腎組織中AOPP與24hUTP、R

10、OS呈正相關，與WT-1呈負相關，ROS與24hUTP呈正相關，與WT-1呈負相關，WT-1與24hUTP呈負相關;尿中PCX與AOPP、ROS、WT-1、24hUTP都無明顯相關性。
　　結論:(1)在MN大鼠模型中，全身及腎臟局部都存在逐漸加重的氧化應激反應，AOPP可作為機體氧化應激指標之一;(2) MN大鼠腎臟的氧化應激反應是導致足細胞損傷的原因之一;(3) AOPP可能是通過激活NADPH氧化酶途徑誘導足細胞氧化應激反應