晚期氧化蛋白產(chǎn)物誘導(dǎo)大鼠痛覺過(guò)敏及其機(jī)制的研究.pdf

1、痛覺過(guò)敏是一種由神經(jīng)系統(tǒng)受損或者功能障礙引起的機(jī)體對(duì)疼痛刺激的感覺閾值下降，輕微刺激便引起疼痛感覺的臨床常見癥狀。痛覺過(guò)敏明顯降低患者的生活質(zhì)量，帶給患者乃至整個(gè)社會(huì)巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。痛覺過(guò)敏的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，其中最主要的致病因素就是體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)失代償后產(chǎn)生的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species，ROS)。晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AdvancedOxidation Protein Products，AOPPs

2、)在體內(nèi)的最主要來(lái)源是血漿白蛋白與氧化應(yīng)激所形成的含氯氧化物反應(yīng)而成，是一類含有二酪氨酸的蛋白產(chǎn)物。AOPPs不僅被認(rèn)為是氧化應(yīng)激導(dǎo)致蛋白質(zhì)損傷的標(biāo)記物，同時(shí)也是引起氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)。目前尚無(wú)相關(guān)研究表明AOPPs是否參與痛覺過(guò)敏病理生理過(guò)程。本研究旨在觀察AOPPs是否會(huì)誘導(dǎo)SD大鼠出現(xiàn)痛覺過(guò)敏并探究其中的分子機(jī)制。為了驗(yàn)證AOPPs參與SD大鼠痛覺過(guò)敏模型，本研究利用經(jīng)典的完全弗氏佐劑(Complete Freund's

3、 Adjuvant，CFA)誘導(dǎo)SD大鼠痛覺過(guò)敏動(dòng)物模型，通過(guò)氯胺-T法檢測(cè)SD大鼠血漿中AOPPs的含量為對(duì)照組SD大鼠的1.6倍。此外，給予正常SD大鼠靜脈注射體外配制的AOPPs溶液，利用電子Von Frey測(cè)痛儀檢測(cè)SD大鼠機(jī)械縮足閾值明顯下降。對(duì)AOPPs誘導(dǎo)痛覺過(guò)敏的SD大鼠背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal Root Ganglia，DRG)組織進(jìn)行免疫熒光染色和蛋白免疫印跡檢測(cè)，結(jié)果表明AOPPs明顯上調(diào)組織中NADPH氧化酶1(

4、Nox1)、NADPH氧化酶4(Nox4)、瞬時(shí)感受器電位(Transient Receptor Potential，TRP) Vanilloid1通道(TRPV1)和降鈣素基因相關(guān)肽(Calcitonin Gene-Related Peptide，CGRP)的表達(dá)。將原代培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元細(xì)胞作為體外研究的對(duì)象，利用DCFH-DA熒光染料通過(guò)多功能酶標(biāo)儀和激光共聚焦掃描顯微鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)AOPPs誘導(dǎo)DRG神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生大量的ROS，

5、并且通過(guò)小干擾RNA技術(shù)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)大量的ROS來(lái)自于AOPPs對(duì)細(xì)胞中Nox1蛋白和Nox4蛋白的激活。除此之外，利用細(xì)胞蛋白免疫印跡的方法發(fā)現(xiàn)AOPPs可以明顯激活TRPV1離子通道，并且促進(jìn)DRG神經(jīng)元細(xì)胞合成和釋放大量神經(jīng)肽類物質(zhì)CGRP，同時(shí)引起鈣離子大量流入DRG神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)中，擾亂細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)AOPPs在CFA誘導(dǎo)痛覺過(guò)敏的大鼠血漿中明顯升高，并且成功地建立了體外配制的AOPPs誘導(dǎo)大鼠痛覺過(guò)敏動(dòng)物模型