鞣花酸體外抗紅色毛癬菌作用及機制研究.pdf

1、目的：以紅色毛癬菌（Trichophyton rubrum）為研究對象，紫草素和特比奈酚為陽性對照藥，探討地錦草有效成分鞣花酸抗紅色毛癬菌活性，研究其對真菌細胞超微結(jié)構(gòu)、細胞凋亡及其細胞生物合成相關(guān)基因表達量的影響，闡明其抗真菌作用的機制，為深入研究鞣花酸抗紅色毛癬菌靶位和其開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)，為其臨床應(yīng)用治療皮膚癬菌病提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：⑴采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（NCCLS）推薦的《產(chǎn)孢絲狀真菌的液基稀釋法抗真菌藥物

2、敏感性試驗方案（M38-A），測定地錦草有效成分鞣花酸及其不同提取部位對4株紅色毛癬菌（Trichophyton rubrum）、石膏樣毛癬菌（Trichophyton mentagrophytes）、白色念珠菌（Candida albicans）、近平滑念珠菌（Candida prapsilosis）臨床常見真菌的MIC值，確定其抗真菌譜，篩選出對其敏感的真菌菌株。參考MIC結(jié)果，進一步測定鞣花酸對紅色毛癬菌細胞生長抑制率。⑵鞣花酸作

3、用于紅色毛癬菌（T.rubrum）后，按常規(guī)方法進行樣品處理，利用掃描電子顯微鏡（Scanning Electron Microscope，SEM），觀察其對紅色毛癬菌細胞表面形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。⑶鞣花酸作用于紅色毛癬菌后，分離菌絲樣品，經(jīng)過洗滌、染色等樣品前處理后，設(shè)低（64μg·mL-1）、中（128μg·mL-1）、高（256μg·mL-1）劑量組，采用AinexinV-FITC/PI雙染法考察其對紅色毛癬菌細胞凋亡的影響。⑷鞣花酸作

4、用于紅色毛癬菌后，采用RT-PCR方法檢測其對真菌細胞膜麥角甾醇生物合成通路有關(guān)ERG11、SUB1、MEP4、ERG6等基因表達的影響。
　　結(jié)果：①鞣花酸對念珠菌的平均MIC值為256μg·mL-1、對石膏樣毛癬菌的平均MIC值為128μg·mL-1，其中對紅色毛癬菌最為敏感，平均MIC值為64μg·mL-1。地錦草有效部位對紅色毛癬菌（T. rubrum）、石膏樣毛癬菌（T. mentagrophytes）的平均MIC值大于

5、1024μg·mL-1，對近平滑念珠菌（C. parapsilosis）、白色念珠菌（C. albicans）的平均MIC均大于2048μg·mL-1；②掃描電子顯微鏡（SEM）下觀察，鞣花酸（64μg·mL-1）作用于紅色毛癬菌后真菌細胞表面皺縮不平，明顯變形膨脹，且可見表層剝離，菌絲破裂，呈粘糊狀，細胞內(nèi)容物溢出；③鞣花酸作用于紅色毛癬菌后，鞣花酸低、中、高濃度的細胞壞死率依次為：16.6％、20.6%、27.3%。④鞣花酸低、中、

6、高劑量的誘導(dǎo)下MEP4、SUB1和ERG11基因的表達量下調(diào)分別為0.1526、0.0726、0.0585，0.2093、0.1331、0.0857，0.0791、0.0423、0.0400等不同濃度的鞣花酸對ERG6的上調(diào)表達量分別為2.6950、4.1398、4.8764。差異有顯著性（P＜0.05）。
　　結(jié)論：鞣花酸具有顯著的抗真菌活性，對淺部致病真菌有較強的抑制作用，其中對紅色毛癬菌最敏感?？梢种萍t色毛癬菌生長，通過破壞