人孕中期胎兒結(jié)膜上皮干細(xì)胞定位特征的初步研究.pdf

1、本文參考有關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)用免疫組化方法研究孕中期不同胎齡胎兒結(jié)膜上皮細(xì)胞中，k7，k14，k19，P63和PCNA的表達(dá)及分布情況，探討人胎兒結(jié)膜上皮干細(xì)胞的定位特征。 材料和方法 1．材料選擇 取正常引產(chǎn)六小時(shí)內(nèi)的胎兒。17周兩例，19周兩例，20周兩例，23周兩例，合計(jì)8例16支眼。所有病例無(wú)遺傳病史和孕期感染史，且取材經(jīng)過(guò)胎兒家屬及醫(yī)院的許可。 2．組織標(biāo)本制備 連眼瞼取出完整眼球，除去皮膚及皮

2、下軟組織(瞼緣保留)剪除后部鞏膜，取出玻璃體及色素膜，沿眼球矢狀面剪取眼球組織塊(呈窄條狀，包含瞼緣、全部瞼結(jié)膜、球結(jié)膜、穹隆部結(jié)膜和部分角膜組織)。40g/L多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。將組織蠟塊制成3-5μm的切片。 3．SP免疫組化染色 采用兩步法，嚴(yán)格按照SP試劑盒(購(gòu)自福建邁新公司)說(shuō)明書(shū)程序操作，k7，k14，k19，P63和PCNA抗體(購(gòu)自邁新公司)的工作濃度為1：100。取相應(yīng)切片按免疫組化SP法染色，

3、切片脫蠟至水，新鮮配制30ml/LH<,2>O<,2>室溫孵育10min以滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶：修復(fù)抗原，將切片放入檸檬酸緩沖液，微波爐加熱10min。待其自然冷卻后用正常兔血清室溫封閉20min，除去多余血清，滴加一抗(1：150)，室溫孵育70min，PBS洗3次．滴加過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，室溫孵育15min，PBS洗3次．DAB顯色4min，蘇木素復(fù)染，切片脫水，透明，封閉，空白對(duì)照以PBS代替一抗。K7、K14、K19和

4、P63及PCNA染色方法及步驟相同。 結(jié) 果 P63及PCNA在孕中期胎兒結(jié)膜上皮表達(dá)情況一致：主要表達(dá)在瞼緣 皮膚粘膜交界處及角膜緣上皮的深層細(xì)胞。K19主要表達(dá)在穹隆部及球結(jié) 膜的上皮細(xì)胞。K14表達(dá)在瞼緣皮膚粘膜交界處及瞼結(jié)膜的上皮細(xì)胞。 K7表達(dá)在穹隆部至角膜緣的上皮細(xì)胞。 結(jié) 論 細(xì)胞角蛋白K7、K14、K19和P63及PCNA在人孕中期不同胎齡的胎兒 結(jié)膜上皮細(xì)胞的特征