MicroRNA-21對(duì)心房顫動(dòng)心肌纖維化及心肌成纖維細(xì)胞增殖的調(diào)控作用機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:心房顫動(dòng)(atrial fibrillation,AF)是臨床上最常見(jiàn)的快速型心律失常之一,心房顫動(dòng)的發(fā)生發(fā)展機(jī)制一直是國(guó)內(nèi)外心血管領(lǐng)域的研究重點(diǎn)、熱點(diǎn),已有研究證明心肌纖維化與 microRNAs之間存在一定的相關(guān)關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測(cè)microRNA-21及其調(diào)控蛋白 Smad7在大鼠心房顫動(dòng)模型中的表達(dá)變化,microRNA-21 mimics和microRNA-21 inhibitors對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響,探

2、究microRNA-21在心房顫動(dòng)心肌纖維化過(guò)程中的分子機(jī)制。
  方法:利用皮下注射異丙腎上腺素(ISO)制備大鼠心房顫動(dòng)心肌纖維化模型。隨機(jī)將60只SD雄性大鼠均分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每組30只,其中實(shí)驗(yàn)組給予皮下注射ISO5mg/kg·d、空白對(duì)照組給予等劑量生理鹽水皮下注射,連續(xù)注射14天后處死大鼠,取下心臟,分別獲取各組心肌組織標(biāo)本。用Lipofectamine?2000 Reagent向大鼠心肌成纖維細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi

3、croRNA-21 mimics和inhibitors及其陰性對(duì)照,48~72 h后檢測(cè)各指標(biāo)。用HE和Masson染色法測(cè)算心肌組織中的心肌纖維化程度和膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF);qRT-PCR檢測(cè)各組 microRNA-21,TGF-β1和Smad7的mRNA水平;Western blot法測(cè)定各組TGF-β1和Smad7的表達(dá);MTT法檢測(cè) microRNA-21 mimics和inhibitors對(duì)心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響。

4、r>  結(jié)果:HE染色和Masson染色顯示實(shí)驗(yàn)組中大鼠心肌組織間質(zhì)中出現(xiàn)了明顯的膠原纖維增生,計(jì)算心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)較空白對(duì)照組明顯增加;相對(duì)于正常組,大鼠心房顫動(dòng)模型實(shí)驗(yàn)組心房組織中microRNA-21和TGF-β1表達(dá)上調(diào),而Smad7表達(dá)下降。轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimics的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中,microRNA-21高表達(dá),TGF-β1表達(dá)上升,Smad7表達(dá)下降;轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimic

5、s的心肌成纖維細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng);轉(zhuǎn)染microRNA-21 inhibitors的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中,得到完全相反的結(jié)果。
  結(jié)論:皮下注射 ISO能誘導(dǎo)大鼠心房顫動(dòng)并使大鼠心肌發(fā)生明顯的纖維化,心房組織中microRNA-21的高表達(dá)可通過(guò)TGF-β1/Smad信號(hào)通路降低Smad7的表達(dá),從而促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生。microRNA-21 mimics可明顯增強(qiáng)心肌成纖維細(xì)胞增殖活性,microRNA-21 inhibi

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