MicroRNA-21對(duì)心房顫動(dòng)心肌纖維化及心肌成纖維細(xì)胞增殖的調(diào)控作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：心房顫動(dòng)（atrial fibrillation，AF）是臨床上最常見(jiàn)的快速型心律失常之一，心房顫動(dòng)的發(fā)生發(fā)展機(jī)制一直是國(guó)內(nèi)外心血管領(lǐng)域的研究重點(diǎn)、熱點(diǎn)，已有研究證明心肌纖維化與 microRNAs之間存在一定的相關(guān)關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)旨在檢測(cè)microRNA-21及其調(diào)控蛋白 Smad7在大鼠心房顫動(dòng)模型中的表達(dá)變化，microRNA-21 mimics和microRNA-21 inhibitors對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響，探

2、究microRNA-21在心房顫動(dòng)心肌纖維化過(guò)程中的分子機(jī)制。
　　方法：利用皮下注射異丙腎上腺素（ISO）制備大鼠心房顫動(dòng)心肌纖維化模型。隨機(jī)將60只SD雄性大鼠均分為空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組30只，其中實(shí)驗(yàn)組給予皮下注射ISO5mg/kg·d、空白對(duì)照組給予等劑量生理鹽水皮下注射，連續(xù)注射14天后處死大鼠，取下心臟，分別獲取各組心肌組織標(biāo)本。用Lipofectamine?2000 Reagent向大鼠心肌成纖維細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mi

3、croRNA-21 mimics和inhibitors及其陰性對(duì)照，48~72 h后檢測(cè)各指標(biāo)。用HE和Masson染色法測(cè)算心肌組織中的心肌纖維化程度和膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）；qRT-PCR檢測(cè)各組 microRNA-21，TGF-β1和Smad7的mRNA水平；Western blot法測(cè)定各組TGF-β1和Smad7的表達(dá)；MTT法檢測(cè) microRNA-21 mimics和inhibitors對(duì)心肌成纖維細(xì)胞活化增殖的影響。

4、r>　　結(jié)果：HE染色和Masson染色顯示實(shí)驗(yàn)組中大鼠心肌組織間質(zhì)中出現(xiàn)了明顯的膠原纖維增生，計(jì)算心肌間質(zhì)膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）較空白對(duì)照組明顯增加；相對(duì)于正常組，大鼠心房顫動(dòng)模型實(shí)驗(yàn)組心房組織中microRNA-21和TGF-β1表達(dá)上調(diào)，而Smad7表達(dá)下降。轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimics的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中，microRNA-21高表達(dá)，TGF-β1表達(dá)上升，Smad7表達(dá)下降；轉(zhuǎn)染microRNA-21 mimic

5、s的心肌成纖維細(xì)胞增殖活性明顯增強(qiáng)；轉(zhuǎn)染microRNA-21 inhibitors的大鼠心肌成纖維細(xì)胞中，得到完全相反的結(jié)果。
　　結(jié)論：皮下注射 ISO能誘導(dǎo)大鼠心房顫動(dòng)并使大鼠心肌發(fā)生明顯的纖維化，心房組織中microRNA-21的高表達(dá)可通過(guò)TGF-β1/Smad信號(hào)通路降低Smad7的表達(dá)，從而促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生。microRNA-21 mimics可明顯增強(qiáng)心肌成纖維細(xì)胞增殖活性，microRNA-21 inhibi