尖葉假龍膽對心肌纖維化的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、心肌纖維化（myocardial fibrosis，MF）是指心肌間質(zhì)中心臟成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積的病理過程，這種病理變化在多種心血管疾病中普遍存在，可導(dǎo)致心肌組織結(jié)構(gòu)破壞和功能紊亂，甚至引起心源性猝死。心肌纖維化的嚴(yán)重程度和心血管疾病的發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)，但是目前尚缺乏有效的防治手段。因此，深入研究心肌纖維化的發(fā)病機(jī)制并尋找治療靶點是國內(nèi)外研究的熱點問題。民族藥物學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，內(nèi)蒙古地區(qū)的居民有飲用尖葉假龍膽(Genti

2、anella acuta(Michx.) Hulten，Gentianellaacuta)茶的習(xí)慣，認(rèn)為對心臟有益，但是目前尚缺乏相關(guān)的文獻(xiàn)報道。本實驗利用異丙腎上腺素(Isoproterenol，ISO)建立大鼠心肌纖維化模型，觀察尖葉假龍膽對大鼠心肌纖維化的影響，并從分子水平及基因水平進(jìn)一步探討其抗心肌纖維化的作用機(jī)制，旨在為尖葉假龍膽用于防治心肌纖維化提供實驗和理論依據(jù)。
　　目的:本研究利用ISO誘導(dǎo)的心肌纖維化動物模型，

3、通過檢測心肌細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御能力、心功能及心肌組織病理學(xué)變化，觀察尖葉假龍膽對心肌纖維化的影響。通過免疫組化與分子生物學(xué)技術(shù)檢測核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-p65，NF-κB-p65)、轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growthfactor-β1，TGF-β1）與結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)的表達(dá)水平等指標(biāo)變化，探討尖葉假龍膽抑制心肌纖維化的抗炎和抗

4、氧化的機(jī)制。
　　方法:SPF級雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機(jī)分成5組(n=8)，分別是:正常對照組、模型組(ISO)、高劑量藥物干預(yù)組(ISO+1.2g/kgGentianella acuta)、中劑量藥物干預(yù)組(ISO+0.6g/kg Gentianella acuta)、低劑量藥物干預(yù)組(ISO+0.3g/kg Gentianella acuta)。模型組連續(xù)7天皮下注射ISO（5mg/kg，1/日），建立

5、心肌纖維化動物模型。干預(yù)組從造模第二天開始給予不同劑量濃度（1.2，0.6，0.3g/kg）的尖葉假龍膽灌胃治療，每日一次，持續(xù)21天。實驗過程中，每周記錄每只大鼠的體重和心電圖。于實驗第22天禁食水12h后稱重，麻醉后行血流動力學(xué)檢測，隨后處死大鼠，分離心臟并稱重，取左心室行生化及組織病理學(xué)檢查，并用免疫組化、蛋白印跡、PCR等方法，檢測各組的NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、

6、尖葉假龍膽對體重和心臟質(zhì)量指數(shù)的影響
　　與正常對照組相比(325.71±9.21g，2.74±0.04mg/g，1.81±0.02mg/g)，模型組大鼠的體重(BW)降低（282.36±8.14g），心重指數(shù)(CwI)和左心室重指數(shù)(LVWI)升高（2.97±0.03mg/g，2.15±0.03mg/g）。與模型組相比，三種不同劑量濃度的尖葉假龍膽均可使大鼠體重增加，心重指數(shù)和左心室重指數(shù)明顯下降(P＜0.05)。
　　2

7、、尖葉假龍膽對心電圖波形的影響
　　與正常對照組相比，模型組可見高大T波、ST段抬高、R波降低，尖葉假龍膽干預(yù)組的心電圖基本接近正常。
　　3、尖葉假龍膽對心功能的影響
　　與正常對照組相比，模型組左心室舒張末期壓(LVEDP)和心率（HR）明顯升高，左心室壓最大上升速率(LVSP)和左心室壓最大上升/下降速率(±dP/dt max)降低。與模型組相比，三種不同劑量濃度的尖葉假龍膽組LVEDP和心率明顯下降，LVSP和

8、±dP/dt max明顯升高(P＜0.05)。
　　4、尖葉假龍膽對抗氧化防御的影響
　　與正常對照組相比（6.79±0.36nmol/mg.prot，12.21±0.42U/mg.prot，4.76±0.25 mg/L），模型組的丙二醛(MDA)含量（11.28±0.31 nmol/mg.prot）明顯增加，超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH)水平(6.84±0.29 U/mg.prot，2.43±0.14

9、mg/L)明顯降低。與模型組相比，尖葉假龍膽干預(yù)組使MDA含量降低，SOD和GSH水平增加(P＜0.01)。
　　5、尖葉假龍膽對膠原含量的影響
　　與正常對照組相比（0.38±0.02ug/mg），模型組羥脯氨酸(Hydroxyproline)含量明顯增加(0.92±0.03ug/mg)。與模型組相比，高、中、低三種不同劑量的尖葉假龍膽干預(yù)組（0.58±0.02ug/mg，0.43±0.01ug/mg，0.43±0.02u

10、g/mg）中羥脯氨酸含量均明顯降低(P＜0.01)，分別下降了36.96％，53.26％，53.26％。
　　6、尖葉假龍膽對病理學(xué)變化的影響
　　與正常對照組相比，異丙腎上腺素誘導(dǎo)嚴(yán)重的心肌組織結(jié)構(gòu)改變，包括廣泛纖維化和炎細(xì)胞浸潤。三種不同劑量濃度的尖葉假龍膽干預(yù)組的纖維化和炎性細(xì)胞浸潤程度較輕。
　　7、尖葉假龍膽對心肌纖維化程度的影響
　　模型組出現(xiàn)明顯的心肌纖維化改變。與模型組比較，三種不同劑量濃度的尖葉

11、假龍膽干預(yù)組纖維化程度均明顯減輕。
　　8、尖葉假龍膽對NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF蛋白表達(dá)的影響
　　正常對照組NF-κB-p65、TGF-β1和CTGF含量較少，模型組蛋白表達(dá)明顯增加，而三種不同劑量濃度的尖葉假龍膽均使NF-κB、TGF-β1和CTGF的表達(dá)明顯下降。
　　9、尖葉假龍膽對TGF-β1和CTGF mRNA表達(dá)的影響
　　與正常對照組相比（1.16±0.17，1.13±0.17）