誘導(dǎo)幼羔卵泡發(fā)育及體外胚胎生產(chǎn)技術(shù)研究.pdf

1、本文研究了運(yùn)輸應(yīng)激、重復(fù)激素處理對誘導(dǎo)羔羊卵泡發(fā)育(簡稱“幼羔超排”)效果的影響，比較了幼羔超排后所采集卵母細(xì)胞與從屠宰場所獲成年羊卵巢卵母細(xì)胞的體外成熟、體外受精及早期胚胎發(fā)育能力，并研究了精液處理方法以及在發(fā)育液中添加EDTA對幼羔卵母細(xì)胞體外受精及早期胚胎發(fā)育能力的影響，此外還開展了玻璃化冷凍保存幼羔卵母細(xì)胞技術(shù)研究，結(jié)果如下: 運(yùn)輸應(yīng)激組與對照組只均獲卵數(shù)(39.3±21.2vs 41.2±20.8枚)、只均獲可用卵數(shù)(

2、39.0±189 vs 38.4±17.3枚)和只均獲可用卵率(98.1％vs 93.3％)均無顯著性差異(P>0.05)。重復(fù)激素處理組只均獲卵數(shù)、只均獲可用卵數(shù)(15.0±8.8和14.24±6.3枚)均極顯著性低于第一次激素處理組(40.34±10.8和38.7±9.7枚)(P<0.01)，但兩組只均獲可用卵率無顯著性差異(P>0.05)。 羔山羊卵母細(xì)胞體外成熟率(70.1％)顯著性低于從屠宰場所獲成年羊卵巢卵母細(xì)胞(9

3、0.7％)(P<0.05)。羔山羊卵母細(xì)胞體外受精后的卵裂率和桑椹胚率(59.0％和17.4％)都極顯著性低于成年山羊卵巢卵母細(xì)胞(82.4％和46.4％)(P<0.01)。羔綿羊卵母細(xì)胞利用新鮮精液進(jìn)行體外受精(IVF)48 h的卵裂率(51.03％)顯著性高于新鮮精液低溫保存組(42.02％)和精液冷凍保存組(46.30％)(P<0.05)，精液低溫保存組(42.02％)和冷凍保存組(46.30％)間卵裂率無顯著性差異(P>0.05

4、)。在受精液和胚胎發(fā)育液中分別添加10μnol EDTA，IVF 48 h的卵裂率(59.0％)與對照組(50.8％)無顯著差異(P>0.05)，但I(xiàn)VF 120 h發(fā)育至16細(xì)胞以上胚胎的比例(100％)極顯著高于對照組(46.9％)(P<0.01)。幼羔超排所生產(chǎn)體外胚胎進(jìn)行胚胎移植的產(chǎn)羔率為12.5％，產(chǎn)下3只健康羔羊。 利用含有2.5％DMSO+27.5％EG的玻璃化液(2液)，采用OPS法冷凍保存羔山羊超排卵母細(xì)胞解凍