小麥幼胚分生組織團(tuán)誘導(dǎo)及GS5和Ghd7的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、小麥?zhǔn)侵饕募Z食作物之一。利用轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)可以定向改良性狀的特點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)小麥高產(chǎn)育種，對(duì)滿足日益增長(zhǎng)的糧食需求意義重大。本研究實(shí)現(xiàn)了15個(gè)基因型小麥幼胚非愈傷性分生組織團(tuán)的誘導(dǎo)培養(yǎng);采用基因槍轟擊和農(nóng)桿菌介導(dǎo)兩種方法對(duì)小麥進(jìn)行了水稻基因GS5和Ghd7的遺傳轉(zhuǎn)化;對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了PCR、RT-PCR檢測(cè)鑒定;調(diào)查了T4世代轉(zhuǎn)GS5基因株系農(nóng)藝性狀，對(duì)籽粒增寬株系的穎殼及種子進(jìn)行了石蠟切片觀察。主要研究結(jié)果如下:
　　1.15個(gè)栽

2、培品種小麥幼胚均可形成分生組織團(tuán)，成團(tuán)率達(dá)到84.6％以上，其中龍30可高達(dá)161.26％，品種間成團(tuán)率略有差異，誘導(dǎo)成團(tuán)無(wú)基因型依賴。
　　2.對(duì)單基因轉(zhuǎn)化和雙基因共轉(zhuǎn)化的比較發(fā)現(xiàn)，在質(zhì)粒用量一致和方法一定的情況下，轉(zhuǎn)化質(zhì)粒種類的增多并不影響分生組織團(tuán)的抗性率、分化率和成苗率。
　　3.基因槍轟擊時(shí)抗性率、分化率和成苗率均高于農(nóng)桿菌介導(dǎo)?；驑屴Z擊的抗性率、分化率和成苗率分別為14.99％、31.38％和16.48％;農(nóng)桿

3、菌介導(dǎo)則分別為5.19％、21.39％和5.36％。
　　4.PCR檢測(cè)，兩種方法分別獲得鄭9023的GS5陽(yáng)性植株1株、8株，Ghd7陽(yáng)性植株1株、18株。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GS5或Ghd7轉(zhuǎn)基因植株均繁殖至T2代，目的基因得以傳遞，其中Ghd7-3株系陽(yáng)性率達(dá)到100％。
　　5.GS5&Ghd7基因的共轉(zhuǎn)化，兩種方法分別獲得189株、5株移栽成活的抗性苗。PCR檢測(cè)表明兩種轉(zhuǎn)化方法均能實(shí)現(xiàn)一次轉(zhuǎn)化，獲3種類型轉(zhuǎn)基因植株:GS

4、5+Ghd7-、GS5-Ghd7+和 GS5+ Ghd7+?；驑屴Z擊所得GS5+ Ghd7+植株傳至T2代。實(shí)現(xiàn)了分生組織團(tuán)作為受體的雙基因共轉(zhuǎn)化。
　　6.對(duì)前人所得12個(gè)T4代GS5株系性狀調(diào)查發(fā)現(xiàn):不同品種在各個(gè)性狀上表現(xiàn)不同，同一品種株系間也有差異。其中10個(gè)株系籽粒顯著增寬，鄭-2株系籽粒表現(xiàn)最突出，粒寬增寬12.04％，增長(zhǎng)2.24％，長(zhǎng)寬比降低9.17％，千粒重增重8.73g。
　　7.RT-PCR顯示GS5