小麥幼胚高頻再生及外源DNA電擊轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、小麥是我國主要的糧食作物之一,水分不足常限制其產(chǎn)量增加,改良小麥的抗旱性已成為倍受關(guān)注的研究內(nèi)容.為此,本文從三個方面進行了研究:①以10個不同基因型的小麥幼穗、幼胚為外植體,建立小麥高效成株體系;②優(yōu)化電擊轉(zhuǎn)化法的主要參數(shù);③將抗旱小麥外源DNA進行電擊轉(zhuǎn)化,并對轉(zhuǎn)化植株進行形態(tài)觀察、過氧化物酶和可溶性蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺垂直板凝膠電泳分析.主要研究結(jié)果如下:1.正交試驗研究表明,誘導(dǎo)培養(yǎng)基中附加2,4-D 2.0mg/L+KT 0.4m

2、g/L+NAA 0.01mg/L+CH300 mg/L的組合最佳;基因型對小麥愈傷組織誘導(dǎo)率影響不大,而主要影響到胚性愈傷組織誘導(dǎo)率(P<0.01);不同基因型幼穗和幼胚來源的胚性愈傷組織中,基因型之間分化能力存在極顯著差異(P<0.01);其中6-90的幼胚易培養(yǎng),且具有較強的叢生芽分化能力,是作為小麥遺傳轉(zhuǎn)化較為理想的受體材料.2.不同胚齡之間胚性愈傷組織誘導(dǎo)率差異顯著(P<0.05),13-14d的胚齡是最適培養(yǎng)范圍.3.培養(yǎng)基中

3、的蔗糖濃度對胚性愈傷組織誘導(dǎo)有顯著的影響(P<0.05),蔗糖濃度50g/L最佳,高濃度的蔗糖(80g/L)表現(xiàn)為抑制反應(yīng),且品種間受抑程度不同.4.低溫(3-4℃)饑餓處理0-7d對小麥幼胚胚性愈傷組織誘導(dǎo)影響不大,7d以后,出愈率和胚性愈傷組織誘導(dǎo)率均下降.5.隨著繼代次數(shù)的增加,胚性愈傷組織有向非胚性愈傷組織轉(zhuǎn)化的趨勢,在不同的基因型與繼代次數(shù)之間,非胚性化的程度分別表現(xiàn)出極顯著的差異(P<0.01).6.2,4-D不利于小麥胚性

4、愈傷組織的分化,6-BA在胚性愈傷組織分化中的效果優(yōu)于KT,6-BA2.0mg/L的培養(yǎng)基中加入NAA0.02mg/L能明顯提高胚性愈傷組織分化率.0.8mg/L的IAA生根效果較好.7.在供試的6種移栽介質(zhì)中,采取蛭石在上,腐殖質(zhì)在下的方式,移栽成活率最高,達到95.65﹪,而且植株的葉色翠綠,生長健壯.8.采用正交試驗設(shè)計,電擊轉(zhuǎn)化大分子復(fù)合物FITC進入胚性細胞團中,在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)一些細胞內(nèi)有熒光發(fā)生,由此確定較適宜的電擊