Med19基因在骨肉瘤中的功能研究及其臨床意義.pdf

1、上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文8第一部分第一部分Med19基因在骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床意義基因在骨肉瘤組織中的表達(dá)及臨床意義1緒論1緒論骨肉瘤(osteosarcoma)是一種起源于間葉組織的惡性腫瘤，是青少年最常見的骨原發(fā)惡性腫瘤[12]。好發(fā)于長骨干骺端，最多見于膝關(guān)節(jié)周圍，75％病例在1020歲之間發(fā)病，少數(shù)見于10歲以前及30歲以后。1970年以前標(biāo)準(zhǔn)治療是截肢術(shù)，大部分患者在兩年內(nèi)死于肺轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為10％20％。上世紀(jì)70

2、年代末和80年代初，形成新輔助化療的概念，即：術(shù)前應(yīng)用化療消滅微轉(zhuǎn)移灶，同時控制腫瘤原發(fā)病灶，根據(jù)化療反應(yīng)調(diào)整術(shù)后化療方案，骨肉瘤5年總生存率已達(dá)60％以上[3]。我國目前未行術(shù)前化療者復(fù)發(fā)率在30％左右，應(yīng)用術(shù)前化療后60％70％患者得以保肢。一些研究還表明，新輔助化療聯(lián)合保肢手術(shù)治療后的患者，其5年生存率可達(dá)70％[45]。因此，骨肉瘤化療現(xiàn)在正處在一個新的階段，必須尋找在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)新的突破口才能取得進(jìn)一步發(fā)展。尋找骨肉瘤標(biāo)

3、志物以判斷其生物學(xué)特性和預(yù)后為眾多學(xué)者所關(guān)注，大量研究表明患者的發(fā)病年齡、腫瘤部位、腫瘤大小、起病到就診的時間，分期、病理類型、血清乳酸脫氫酶（lactatedehydrogenaseLDH）和堿性磷酸酶（alkalinephosphataseALP）水平、化療后壞死率、手術(shù)方式等[6]與骨肉瘤預(yù)后密切相關(guān)。隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，逐漸認(rèn)識到骨肉瘤某些重要基因、蛋白的表達(dá)不但影響骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展[7]，還與骨肉瘤的治療療效有關(guān)。

4、Med19基因位于染色體的11q12.1位置，編碼一種與酵母中促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的Mediat19（Med19）同源的蛋白。中介因子復(fù)合體（Mediat）最早在酵母中發(fā)現(xiàn)，由25個亞基組成的復(fù)合體，它可以與RNA聚合酶II結(jié)合，促進(jìn)或抑制mRNA的合成，結(jié)構(gòu)的上分為頭部、中部和尾部三個部分，其中頭部和尾部對Mediat的活性起決定作用[89]。最近的研究表明哺乳動物和酵母的Mediat在亞基組成、結(jié)構(gòu)、功能等方面有非常強(qiáng)的保守性[10]。中介因子

5、復(fù)合體（Mediat）可以與RNA聚合酶II結(jié)合，促進(jìn)或抑制mRNA的合成在真核細(xì)胞mRNA合成的活化和阻抑中起著關(guān)鍵作用包括促進(jìn)激活的轉(zhuǎn)錄、增強(qiáng)基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄和增強(qiáng)羧基端結(jié)構(gòu)域（CTD）的磷酸化。大量研究表明Mediat各個亞基參與介導(dǎo)多種信號途徑(圖1)，例如上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文10大細(xì)胞癌系中克隆到的人類新基因，在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)并與臨床分期顯著相關(guān)。利用GenBank的UniGene數(shù)據(jù)庫對LCMR1進(jìn)行電子表達(dá)譜分析，結(jié)果表

6、明該基因在多種腫瘤及正常組織中都有分布，例如：類癌、精細(xì)胞癌、肺泡巨噬細(xì)胞、肺上皮細(xì)胞、胰島細(xì)胞癌、乳腺、心臟等[20]?；蛐酒Y(jié)果分析，LCMR1并非作用于某種轉(zhuǎn)移的信號通路，可直接或間接參與和介導(dǎo)了多種信號途徑[21]。近期李金東等[22]利用RNAi技術(shù)沉默肺癌細(xì)胞中Medl9基因，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞生長。丁相福等[23]應(yīng)用shRNA慢病毒載體感染MGC803細(xì)胞后細(xì)胞增殖能力顯著降低、細(xì)胞克隆形成能力明顯減弱，

7、細(xì)胞周期阻滯于G1期，提示Medl9在腫瘤形成過程中具有重要作用。Li等[24]發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織高表達(dá)Med19并與腫瘤分級顯著相關(guān)，證明Med19在人類乳腺癌細(xì)胞增殖中起著重要作用。本實驗通過免疫組織化學(xué)方法檢測骨肉瘤患者組織中Med19蛋白的表達(dá)情況，探討其與骨肉瘤患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，為進(jìn)一步尋找更特異合理的骨肉瘤預(yù)后指標(biāo)提供線索，為指導(dǎo)臨床診治提供論依據(jù)。2材料與方法材料與方法2.1實驗材料2.1.1病例來源收集、整理2

8、0032007年收住上海六院的有完整病例、病理資料的肢體骨肉瘤患者資料，選擇其中經(jīng)過術(shù)前化療手術(shù)術(shù)后化療其他治療的規(guī)范化綜合治療的患者作為本試驗的研究對象。2.1.2腫瘤組織來源收集、整理上述患者在我院病理科存檔的病理報告、HE切片及蠟塊50例，收集據(jù)骨肉瘤切緣5cm的正常骨組織15例作為平行對照。核對原病理報告、HE切片及蠟塊，選擇含骨肉瘤細(xì)胞豐富HE切片對應(yīng)之蠟塊為試驗標(biāo)本，將上述50例骨肉瘤組織蠟塊及15例瘤旁正常骨組織蠟塊連續(xù)切