熒光原位雜交法檢測TERC基因在宮頸癌篩查中的應(yīng)用.pdf

1、宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重危害女性健康。業(yè)已公認(rèn)高危人乳頭瘤病毒(high-risk human papillomavirus，HR-HPV)的持續(xù)感染是宮頸癌發(fā)生的必要條件。但從HR-HPV感染婦女誘發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)發(fā)展為浸潤性官頸癌(invasive cervical cancer，ICC)約需5-20年時(shí)間，這為通過篩查發(fā)現(xiàn)并治療癌前病變以降

2、低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率贏得了時(shí)間。
　　細(xì)胞學(xué)檢查因其快速、價(jià)廉，是目前最常用的方法，在宮頸篩查中仍起著重要作用，并被許多國家作為常規(guī)篩查項(xiàng)目。但細(xì)胞學(xué)檢查并不十分可靠，具有較高的假陰性，通常需要重復(fù)檢查才能獲得滿意的敏感度，且巴氏涂片在腺癌檢測中的敏感度比鱗癌更低。雖然薄層液基細(xì)胞學(xué)(ThinPrep liquid-based cytology test，TCT)等新技術(shù)的出現(xiàn)改善了細(xì)胞學(xué)的制片問題，但并沒有徹底改變其敏感度低

3、的現(xiàn)狀，這也制約著細(xì)胞學(xué)篩查的發(fā)展。
　　HPV檢測是宮頸癌篩查的另一項(xiàng)重要方法。在歐洲國家，HPV檢測正在取代細(xì)胞學(xué)檢查，成為官頸病變初篩的首選。HPV檢測具有很高的敏感性，在大樣本篩查中可濃縮高風(fēng)險(xiǎn)人群，比細(xì)胞學(xué)篩查更為有效。但HPV的感染非常普遍，據(jù)統(tǒng)計(jì)，性活躍婦女終生累積感染率可高達(dá)80％。這種感染通常是一過性的，可通過自身免疫系統(tǒng)及時(shí)清除，并不導(dǎo)致高度CIN及官頸癌的發(fā)生.因而，HPV檢測通常具有較高的假陽性，尤其在年輕

4、女性中其特異性更低。
　　故從宮頸癌篩查及早期診斷的角度出發(fā)，有必要尋找新的手段來替代或協(xié)助常規(guī)篩查方法進(jìn)行綜合判斷，使官頸癌的篩查更加準(zhǔn)確、可靠、富有預(yù)見性.許多針對宮頸癌的研究表明，宮頸上皮細(xì)胞由高度CIN向ICC轉(zhuǎn)變的過程中常常伴有3號染色體長臂(3q)的擴(kuò)增。其中，涉及到的最重要基因可能是位于3q26.3的端粒酶RNA基因(telomerase RNA component，TERC)。該基因的擴(kuò)增可阻止細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤發(fā)

5、生，是宮頸癌形成的早期事件。已經(jīng)有較多學(xué)者研究了 FERC在不同細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)分級中的表達(dá)，然而就TERC在官頸癌篩查中的作用及其與細(xì)胞學(xué)檢查、HPV檢測三者在宮頸癌篩查中的相關(guān)性，目前尚缺乏系統(tǒng)性研究。
　　本研究擬采用熒光原位雜交(fluorecence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)分別檢測官頸疾病門診患者、細(xì)胞學(xué)異常者、HR-HPV陽性者宮頸脫落細(xì)胞中TERC的表達(dá)，并以組織學(xué)診斷作為金標(biāo)準(zhǔn)，同

6、細(xì)胞學(xué)、HR-HPV結(jié)果進(jìn)行比較，評估TERC在宮頸癌篩查中的作用，為宮頸癌的篩查及早期診斷提供新的方法。
　　第一部分 TERC在宮頸鱗癌初篩中的應(yīng)用
　　目的：
　　評價(jià)FISH檢測TERC表達(dá)的效能，并探索其作為初篩手段應(yīng)用于預(yù)測宮頸鱗癌及癌前病變的價(jià)值。
　　方法：
　　收集201例宮頸疾病門診患者的TCT標(biāo)本。所有參與者均行細(xì)胞學(xué)檢查、HR-HPV HC2(Hybrid Capture2，第二代雜

7、交捕獲)、TERC FISH、陰道鏡檢查，并視情況行活檢及組織學(xué)診斷。分析TERC表達(dá)與細(xì)胞學(xué)、HR-HPV及組織學(xué)之間的關(guān)系，并以≥CINⅡ作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，評價(jià)細(xì)胞學(xué)、HR-HPV HC2及TERC FISH三種篩查方法的優(yōu)劣，評估TERC FISH作為官頸鱗癌初篩手段的可行性。統(tǒng)計(jì)分析采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s精確檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.TERC表達(dá)在NILM(negative for intraepithelia

8、l or malignancy，未見上皮內(nèi)病變或惡性病變)、ASC-US(atypical squamous cells of undetermined significance，意義未明的非典型鱗狀細(xì)胞)、LSIL(low-grade squamous intraepithelial lesion，低度鱗狀上皮內(nèi)病變)、ASC-H(atypical squamous cells cannot exclude high-gradesqu

9、amous intraepithelial lesion，不除外高度鱗狀上皮內(nèi)病變的非典型鱗狀細(xì)胞)及HSIL(high-grade squamous intraepithelial lesion，高度鱗狀上皮內(nèi)病變)中的陽性率分別為2.83％、17.39％、37.50％、62.96％及90.48％，且≤LSIL與≥ASC-H組間TERC陽性率存在顯著差異(P<0.001)。
　　2.TERC表達(dá)在HR-HPV陰性組及陽性組中的陽

10、性率分別為4.85％和47.96％，兩組間存在顯著差異(P<0.001)。
　　3.TERC表達(dá)在正常、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宮頸鱗癌中的陽性率分別為6.06％、10.00％、66.67％、72.50％及100.00％，且在≤CINⅠ和≥CINⅡ組間TERC陽性率存在顯著差異(P<0.001)。
　　4.在細(xì)胞學(xué)、HR-HPV與TERC三種篩查方法的比較中，TERC的敏感性及陰性預(yù)測值(negative predic

11、tive value，NPV)低于HPV檢測，與細(xì)胞學(xué)相當(dāng)，但其特異性、陽性預(yù)測值(positive predictive value，PPV)及準(zhǔn)確性明顯優(yōu)于細(xì)胞學(xué)與HR-HPV(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.FISH檢測宮頸鱗狀上皮病變中TERC的表達(dá)與細(xì)胞學(xué)、組織學(xué)分級及HPV檢測結(jié)果間具有良好的一致性。
　　2.FISH檢測TERC具有較高的特異性和準(zhǔn)確性，可作為初篩手段應(yīng)用于宮頸鱗癌的篩查。
　

12、　第二部分 TERC在宮頸鱗癌初篩后的分層作用
　　目的：
　　評估FISH檢測TERC表達(dá)應(yīng)用于官頸鱗癌初篩后的分層價(jià)值。
　　方法：
　　在細(xì)胞學(xué)初篩后的分層中，選擇宮頸疾病門診TCT診斷為ASC-US和LSIL的患者376例(其中ASC-US242例，LSIL134例)；在HR-HPV初篩后的分層中，選擇HR-HPV HC2陽性的患者177例；在初篩后結(jié)果為HR-HPV陽性、細(xì)胞學(xué)輕中度異常的分層中，選擇T

13、CT診斷為ASC-US、LSIL和ASC-H，同時(shí)HR-HPV陽性的患者300例(其中ASC-US129例，LSIL82例，ASC-H89例)。所有患者均行細(xì)胞學(xué)檢查、HR-HPV HC2、TERC FISH、陰道鏡檢查，并視情況行活檢及組織學(xué)診斷。以≥CINⅡ作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算TERC在不同組別分層中的敏感性、特異性、PPV、NPV及準(zhǔn)確性，并與相應(yīng)的分層手段進(jìn)行比較，評估TERC作為分層手段的優(yōu)劣。統(tǒng)計(jì)分析采用χ2檢驗(yàn)或Fisher

14、’s精確檢驗(yàn)、方差分析及非條件Logistic回歸分析。
　　結(jié)果：
　　1.在初篩后細(xì)胞學(xué)ASC-US的分層中，HR-HPV的敏感性優(yōu)勢依然存在(97.73％)，而TERC的特異性及準(zhǔn)確性優(yōu)勢則較為突出(90.40％及87.19％)；在初篩后細(xì)胞學(xué)LSIL的分層中，TERC的敏感性及NPV與HR-HPV無差異(P>0.05)，同時(shí)
　　TERC具有更高的PPV、特異性及準(zhǔn)確性(P<0.001)。
　　2.在初篩

15、后HR-HPV陽性的分層中，進(jìn)一步結(jié)果尚需更多樣本證實(shí)。從目前趨勢來看，TERC的敏感性優(yōu)于或至少與細(xì)胞學(xué)相當(dāng)(83.33％vs.50.00％，P=0.545)，而特異性兩者間無差異(P=0.336)。
　　3.在初篩后HR-HPV陽性、細(xì)胞學(xué)輕中度異常的分層中，TERC在ASC-US、LSIL
　　及ASC-H中預(yù)測CINⅡ+的敏感性分別為81.82％、83.33％、91.94％，特異性分別為93.46％、91.37％、8

16、8.89％，準(zhǔn)確性分別為91.47％、89.02％、91.01％，均獲得了滿意的分層效果。TERC在不同細(xì)胞學(xué)、HR-HPV病毒載量及年齡分組中的敏感性、特異性及準(zhǔn)確性均無差異，且其平均陽性細(xì)胞比率隨病變級別升高而增加。
　　結(jié)論：
　　1.在細(xì)胞學(xué)ASC-US的分層中，TERC檢測與HPV檢測相比，具有更高的特異性及準(zhǔn)確性；在細(xì)胞學(xué)LSIL，的分層中，TERC是一種有效的分層手段。
　　2.在HR-HPV陽性的分層中

17、，TERC檢測的敏感性及特異性與細(xì)胞學(xué)檢查相當(dāng)或更高，是一種細(xì)胞學(xué)以外可供選擇的分層手段。
　　3.在HR-HPV陽性、細(xì)胞學(xué)輕中度異常的分層中，TERC是一種敏感、特異、穩(wěn)定的分層手段。
　　第三部分 TERC應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)檢查腺細(xì)胞異常輔助診斷的初步探討
　　目的：
　　初步探討FISH檢測TERC表達(dá)在細(xì)胞學(xué)檢查為腺細(xì)胞異常時(shí)作為輔助診斷的價(jià)值。
　　方法：
　　選擇宮頸疾病門診TCT診斷為腺細(xì)胞

18、異常的患者35例(其中AGC(atypicalglandular cells，非典型腺細(xì)胞)-NOS(not otherwise specified，無其他特殊意義)19例，AGC傾向瘤變9例，腺癌7例)。所有患者行HR-HPV HC2、TERC FISH、陰道鏡下活檢、頸管搔刮術(shù)(endocervical curettage，ECC)及組織學(xué)診斷。分析TERC表達(dá)與腺細(xì)胞異常的細(xì)胞學(xué)及組織學(xué)分級之間的關(guān)系，評估TERC FISH作為篩

19、查手段應(yīng)用于宮頸腺癌預(yù)測中的可行性。統(tǒng)計(jì)分析采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s精確檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：
　　1.TERC表達(dá)在AGC-NOS、AGC傾向瘤變、腺癌中的陽性率分別為36.84％、88.89％、100.00％，且AGC-NOS與>AGC-NOS組間TERC陽性率存在差異(P=0.047)。
　　2.TERC陽性比例隨宮頸病變組織學(xué)級別升高而增高，在宮頸原位腺癌(adenocarcinoma in situ，AIS