NGF刺激PC12細胞神經分化過程中轉錄因子E2F1參與PTPRO表達調控的研究.pdf

1、PTPRO是受體型酪氨酸磷酸酯酶家族的一員，其功能主要涉及神經組織中軸突的生長和導向，以及腫瘤抑制。PTPRO的表達具有組織特異性，在哺乳動物中PTPRO主要表達于不同發(fā)育時期的腎臟組織和神經組織，而在很多腫瘤細胞中則通過DNA甲基化沉默。有文獻報道，PTPRO在機體發(fā)育和腦的成熟中發(fā)揮重要作用，例如在腎臟中，PTPRO表達于發(fā)育早期的腎小球細胞頂部和發(fā)育成熟的腎小球足細胞頂部；在腦中，PTPRO基因最高表達出現(xiàn)于妊娠中后期，這一時期也

2、是腦部軸突發(fā)生的主要時期。已有研究證明，受體型酪氨酸磷酸酯酶家族（RPTPs）成員在調節(jié)果蠅神經系統(tǒng)發(fā)育過程中起主要作用。在脊椎動物中，許多受體型酪氨酸磷酸酯酶家族（RPTPs）成員例如：typeⅡa RPTPs，typeⅢ RPTP已經在軸突生長過程中發(fā)揮重要作用，但是PTPRO參與軸突生長的具體機制以及表達調控機制卻報道很少。 本論文旨在研究PTPRO因在NGF誘導PC12軸突分化過程中表達升高的轉錄調控機制。通過反轉錄PC

3、R（RT—PCR）、real—time RCR和Western blotinging檢測我們發(fā)現(xiàn)，NGF誘導PC12軸突分化后，PTPRO基因表達發(fā)生了明顯的上調。細胞轉染和熒光素酶報告基因分析結果顯示，外源過表達轉錄因子E2F1能顯著提高PTPRO啟動子熒光素酶報告基因的活性。real—time RCR和western bloting結果表明，轉錄因子E2F1提高了細胞內源PTPTO基因的mRNA和蛋白表達水平。點突變實驗確定了PTP