RNAi敲除Ufd1基因表達逆轉人結腸癌細胞株SW1116-HCPT對羥基喜樹堿耐受的研究.pdf

1、上海交通大學博士學位論文RNAi敲除Ufd1基因表達逆轉人結腸癌細胞株SW1116HCPT對羥基喜樹堿耐受的研究姓名：陳翔申請學位級別：博士專業(yè)：內科學（消化系?。┲笇Ы處煟喝街救A20090401上海交通大學博士學位論文摘要摘要(第二部分)目的：明確敲除Ufdl能否逆轉SWI116／HCPT對羥基喜樹堿的耐受性。方法：分別用噻唑藍(MTT)行體外藥物敏感實驗比較干擾組和對照組細胞對羥基喜樹堿的敏感性；比色法比較在羥基喜樹堿作用下干擾組細

2、胞和對照組細胞caspase3的活性；流式細胞分析羥基喜樹堿對兩組細胞增殖周期的影響。并用Westernblot檢測在羥基喜樹堿作用下，兩組細胞的pJNK、pAkt和p53的表達情況和細胞內泛素化蛋白質的儲留情況。結果：體外藥物敏感實驗結果提示干擾組細胞對羥基喜樹堿的敏感性遠高于對照組伊001)，Caspase3活性測定結果提示在相同濃度和接觸時間的羥基喜樹堿作用下，干擾組細胞Caspase3活性均高于對照組(PO01)，提示敲除Ufd

3、l能夠強化羥基喜樹堿誘導SWlll6／HCPT的Caspase3活化而逆轉其對羥基喜樹堿的耐受性。流式細胞分析結果顯示在羥基喜樹堿作用下干擾組和對照組細胞的增殖都出現(xiàn)了S期阻滯，但是干擾組細胞的S期阻滯現(xiàn)象較對照組更為顯著(p005)。Westernblot檢測發(fā)現(xiàn)干擾組細胞的PJNK、p53和泛素表達水平高于對照組，兩組細胞均未檢測到pAkt的表達。結論：敲除Ufdl能夠逆轉SWlll6／HCPT對羥基喜樹堿的耐藥性，上調p53的表達