DADS與RORα激動劑對人胃癌細(xì)胞EMT與遷移侵襲的作用.pdf

1、[目的]本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，與RORα激動劑SR1078比較，進(jìn)一步探討二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）上調(diào)RORα對人胃癌MGC803細(xì)胞EMT與遷移侵襲的作用及其分子機制，是否具有RORα激動劑的作用。
　　[方法]分別用DADS、RORα激動劑SR1078、RORα抑制劑T0901317處理MGC803細(xì)胞，倒置相差顯微鏡觀察各處理組MGC803細(xì)胞形態(tài)變化。MTT法、遷移實驗和侵襲實驗檢測

2、各實驗組MGC803細(xì)胞增殖、遷移與侵襲的能力；Western blot檢測各實驗組MGC803細(xì)胞總蛋白中RORα、β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin與E-cadherin蛋白表達(dá)，檢測MGC803細(xì)胞核中β-catenin蛋白的表達(dá)；免疫熒光檢測RORα，β-catenin、Rac1、TGF-β1、Vimentin與E-cadherin蛋白的表達(dá)與定位；免疫共沉淀檢測RORα與β-catenin結(jié)合情況。<

3、br>　　[結(jié)果]相差顯微鏡檢測結(jié)果顯示，對照組細(xì)胞多呈梭形而圓形較少；T0901317組長梭形細(xì)胞更多而圓形細(xì)胞更少，T0901317+DADS組較T0901317組圓形細(xì)胞增多，梭形減少；DADS組與SR1078組細(xì)胞大部分呈圓形，梭形細(xì)胞明顯減少，而SR1078+DADS組細(xì)胞基本呈圓形，較DADS組與SR1078組梭形細(xì)胞更為少見。MTT比色法、遷移實驗和侵襲實驗結(jié)果顯示， SR1078組和 DADS組較對照組細(xì)胞的增殖與遷移侵

4、襲能力顯著抑制(P<0.05)；T0901317較對照組細(xì)胞的增殖與遷移侵襲能力明顯增強，而T0901317+DADS組細(xì)胞的增殖與遷移侵襲能力較T0901317組明顯下降。Western blot結(jié)果顯示， DADS組和SR1078組較對照組RORα與E-cadherin顯著上調(diào)和Rac1、TGF-β1與Vimentin顯著下調(diào)；T0901317組較對照組RORα與E-cadherin顯著下調(diào)和TGF-β1、Rac1與Vimentin

5、顯著上調(diào)，而T0901317+DADS組 RORα與 E-cadherin表達(dá)較 T0901317組上調(diào)和Rac1、TGF-β1與 Vimentin下降。在總蛋白中，各組β-catenin蛋白表達(dá)無顯著差異，但 DADS與 SR1078能顯著抑制核內(nèi)β-catenin表達(dá)，T0901317明顯增強核內(nèi)β-catenin表達(dá)，而T0901317+DADS組核內(nèi)β-catenin較T0901317下調(diào)。免疫熒光結(jié)果顯示，SR1078組和DA

6、DS組的RORα和E-cadherin蛋白陽性染色較對照組增強，TGF-β1、Rac1與 Vimentin陽性較對照組減弱， T0901317組以上五種蛋白免疫熒光結(jié)果與DADS和SR1078的結(jié)果相反，而DADS處理T0901317組細(xì)胞后，RORα和E-cadherin蛋白陽性較T0901317組陽性增加，TGF-β1、Rac1與Vimentin陽性較T0901317組陽性降低。免疫共沉淀結(jié)果顯示，DADS和SR1078能夠促進(jìn)RO