TLR信號途徑對腫瘤細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：研究HSP70對小鼠肝癌細(xì)胞H22和人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖能力的影響，以探討TLR信號通路對腫瘤細(xì)胞增殖可能的機制。
　　 方法：⑴分別用LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞，RT-PCR檢測TLR2和TLR4mRNA的表達。⑵分別用LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞，作用不同時間后，Western blot檢測 GSK3β信號。⑶分別用LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞，Western blot檢測β-catenin的表達

2、。⑷HSP70刺激MCF-7細(xì)胞3天，RT-PCR檢測cyclinD1a、cyclinD1b mRNA水平。⑸LPS和HSP70分別刺激H22細(xì)胞2天，Western blot檢測HMGB1的表達。⑹體外分別加LPS和HSP70培養(yǎng)H22細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞，采用細(xì)胞計數(shù)方法檢測細(xì)胞增殖。⑺用絲裂霉素處理CFSE標(biāo)記的H22細(xì)胞，同時分別用LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測增殖速度。⑻以LPS和HSP70處理過的H22細(xì)胞

3、接種于昆明小鼠右后腿肌肉內(nèi)，建立實驗性小鼠肝癌模型，并通過比較腫瘤瘤重及成瘤時間觀察LPS及HSP70對H22細(xì)胞成瘤能力的影響。
　　 結(jié)果：①LPS、HSP70刺激H22細(xì)胞后，TLR-2、TLR-4的表達均明顯增加。②隨LPS及HSP70刺激H22細(xì)胞時間增加，磷酸化的GSK3β表達增加，而非磷酸化的GSK3β的總量沒有變化。③經(jīng)LPS、HSP70分別刺激H22細(xì)胞24小時后，β-catenin的表達均明顯增加。④LPS、

4、HSP70處理細(xì)胞后，cyclinD1a表達上調(diào)。⑤LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞2天后，HMGB1表達上調(diào)。⑥LPS和HSP70處理的H22細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞，增殖速度與對照組相比明顯加快。⑦用絲裂霉素處理H22細(xì)胞后，分別用LPS和HSP70刺激H22細(xì)胞，增殖速度均比對照組快。⑧LPS和 HSP70處理2天的H22細(xì)胞接種小鼠，成瘤速度及瘤重均高于對照組。
　　 結(jié)論：LPS和HSP70可通過激活TLR信號通路，進一步