慢性阻塞性肺疾病大鼠膈肌纖維適應(yīng)性變化的研究.pdf

1、目的： 以COPD模型大鼠的膈肌為標(biāo)本，檢測(cè)COPD病程中膈肌的相應(yīng)變化，包括膈肌肌纖維分布，肌纖維中酶活性的變化，探討COPD病程的不同階段膈肌功能狀態(tài)與疾病狀態(tài)的相關(guān)性，揭示膈肌功能的變化規(guī)律。 方法： 選取健康雄性七周齡Wistar大鼠25只，體重180～220g，按體重隨機(jī)分成五組，1．對(duì)照組(n=5)。2．COPD組(n=20)。在自制的密閉有機(jī)玻璃艙內(nèi)用熏煙的方法制作大鼠COPD模型，在COPD組中包

2、括四個(gè)組：A、COPD一天組(n=5)，模型制作成功后，第一天取材：B、COPD一月組(n=5)，模型制作成功后一個(gè)月取材：C、COPD二月組(n=5)，模型制作成功后兩個(gè)月取材：D、COPD三月組(n=5)，模型制作成功后三個(gè)月取材。大鼠活殺，取膈肌做冰凍切片，利用肌球蛋白ATP酶(mATPase)法測(cè)定三磷酸腺苷脫氫酶(ATP酶)活性，三磷酸腺苷脫氫酶活性部位形成棕黑色硫化鈷顆粒沉淀；測(cè)定琥珀酸脫氫酶(SDH)活性，琥珀酸脫氫酶活性

3、部位呈紫藍(lán)色沉淀，利用琥珀酸脫氫酶(線(xiàn)粒體氧化性的標(biāo)志性酶)活性的差異，可以將肌纖維分為氧化型和酵解型兩種類(lèi)型，肌纖維染色深的是氧化型纖維，染色淺的是酵解型纖維。觀察大鼠COPD不同病程膈肌纖維類(lèi)型的適應(yīng)性變化及酶活性變化，與健康對(duì)照組的大鼠膈肌進(jìn)行比較，并且比較COPD不同病程組問(wèn)的差異。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0數(shù)據(jù)包分析，用單因素方差分析，若P<0.05，再進(jìn)行q檢驗(yàn)，比較每?jī)山M的組間差異，并在A,B,C,D四組中進(jìn)行相關(guān)分析，

4、比較干預(yù)因素與測(cè)量因素之間有無(wú)相關(guān)性。 結(jié)果： 1．COPD大鼠模型制作成功：肺組織HE染色切片，光鏡下觀察，其病理改變與人類(lèi)慢性支氣管炎、肺氣腫相似。 2．與對(duì)照組比較，COPD組三磷酸腺苷脫氫酶活性有減少的趨勢(shì)。 3．與對(duì)照組比較，COPD組琥珀酸脫氫酶活性有增加的趨勢(shì)。 4．比較各組膈肌纖維類(lèi)型的變化，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示： (1)COPD四組的氧化型纖維比例均顯著高于對(duì)照組的(P<0.

5、05)：酵解型纖維比例均顯著低于對(duì)照組的(P<0.05)。 (2)COPD中A、B、C組間，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，COPD中B、C、D組間，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 (3)COPD中D組的氧化型纖維比例顯著高于A組(P<0.05)：D組的酵解型纖維比例顯著低于A組(P<0.05)。 (4)COPD疾病的嚴(yán)重程度與氧化型纖維比例的相關(guān)分析結(jié)果：存在正相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論：

6、1．三磷酸腺苷脫氫酶是分解利用能量ATP的酶，研究結(jié)果顯示COPD組的三磷酸腺苷脫氫酶活性?xún)A向于低于對(duì)照組的，即ATP的利用率下降了。 2．琥珀酸脫氫酶(SDH)是線(xiàn)粒體氧化活動(dòng)的標(biāo)志性酶，研究結(jié)果顯示COPD組的琥珀酸脫氫酶活性相對(duì)于對(duì)照組的有增加的趨勢(shì)，表明線(xiàn)粒體的氧化能力增強(qiáng)。 3．然后經(jīng)過(guò)分析表明COPD膈肌肌纖維的SDH/mATPase高于對(duì)照組相應(yīng)的肌纖維的SDH/mATPase；以上這些結(jié)果證明了大鼠COP

7、D膈肌纖維線(xiàn)粒體的氧化能力即產(chǎn)生ATP的能力相對(duì)于ATP的利用率是增加的。 4．根據(jù)膈肌纖維類(lèi)型變化的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，COPD初期膈肌氧化型纖維比例顯著多于對(duì)照組，纖維類(lèi)型傾向于由酵解型向氧化型轉(zhuǎn)化，即膈肌纖維向著耐疲勞類(lèi)型轉(zhuǎn)化，說(shuō)明膈肌的耐疲勞性增加。 5．COPD早期階段，隨著病程的進(jìn)展，膈肌氧化型纖維比例不斷增多，表明酵解型纖維轉(zhuǎn)化為氧化型纖維，COPD嚴(yán)重程度與氧化型纖維比例的相關(guān)性分析說(shuō)明這種轉(zhuǎn)化是與COPD的嚴(yán)