黃芩苷抑制血管平滑肌細(xì)胞遷移的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)遷移是動脈粥樣硬化病變進(jìn)展的一個(gè)關(guān)鍵因素，也是冠狀動脈血管成形術(shù)后再狹窄等心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。血小板源性生長因子(platelet-derivedgrowth factor，PDGF)是血管平滑肌細(xì)胞的強(qiáng)效促絲裂原和趨化劑，在細(xì)胞遷移中發(fā)揮重要的誘導(dǎo)作用。
　　黃芩苷(baicalin)是一種草本衍生的黃酮類化合物，具有廣泛的生物活性

2、，包括消炎、抗氧化、抗增殖活性以及強(qiáng)大的心臟保護(hù)作用。以往研究發(fā)現(xiàn)，黃芩苷對血管平滑肌細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用，但對細(xì)胞遷移的影響尚不清楚。平滑肌22 alpha(smooth muscle22 alpha，SM22α)是血管平滑肌細(xì)胞的分化標(biāo)志基因，可抑制VSMCs由分化型向去分化型的轉(zhuǎn)化和增殖。另有研究顯示，SM22α可通過抑制遷移相關(guān)蛋白，基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)的

3、表達(dá)而阻止腫瘤轉(zhuǎn)移?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，本研究探討黃芩苷在體內(nèi)、外對VSMCs遷移的影響以及SM22α在該過程中的作用。
　　方法與結(jié)果：
　　1、PDGF-BB誘導(dǎo)VSMCs片狀偽足形成和遷移
　　分別用不同濃度(20 ng/ml、50 ng/ml)PDGF-BB刺激靜息期VSMCs不同時(shí)間點(diǎn)(0、2、5、10、30 min)，利用TRITC-鬼筆環(huán)肽標(biāo)記細(xì)胞骨架，激光共聚焦顯微鏡觀察顯示，PDGF-BB刺激5-10 mi

4、n時(shí)，VSMCs均有明顯的片狀偽足形成。
　　2、黃芩苷抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs片狀偽足形成
　　用黃芩苷預(yù)處理VSMCs后，顯著抑制PDGF-BB誘導(dǎo)VSMCs的片狀偽足形成。PDGF-BB可激活Ras-ERK軸，黃芩苷抑制了這一過程。
　　3、黃芩苷抑制球囊損傷誘導(dǎo)的MMP-9的表達(dá)
　　MMP-9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：球囊損傷14 d后血管新生內(nèi)膜中可見大量棕色顆粒和陽性染色的細(xì)胞數(shù)，而黃芩苷

5、能夠顯著抑制球囊損傷誘導(dǎo)的新生內(nèi)膜的形成及MMP-9的表達(dá)，與損傷組相比陽性染色的細(xì)細(xì)胞數(shù)和棕色顆粒顯著減少。
　　4、SM22α通過抑制PDGF-BB激活的Ras-ERK軸進(jìn)而抑制片狀偽足的形成
　　用特異性siRNA敲低內(nèi)源性SM22α表達(dá)，則增強(qiáng)PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs片狀偽足形成。進(jìn)而，用SM22α重組腺病毒表達(dá)載體感染VSMCs，Western blot結(jié)果顯示，過表達(dá)SM22α能抑制Ras-ERK的活性，而

6、敲低SM22α能促進(jìn)Ras-ERK的激活，GTP-Ras和p-ERK水平明顯高于對照組。提示SM22α通過抑制PDGF-BB激活的Ras-ERK軸進(jìn)而抑制了片狀偽足的形成。
　　5、黃芩苷抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的SM22α的磷酸化
　　基于SM22α S181位絲氨酸是其潛在的磷酸化位點(diǎn)，本研究構(gòu)建了SM22α S181突變體S181A和強(qiáng)制磷酸化突變體S181D。結(jié)果顯示，VSMCs中過表達(dá)S181A抑制了PDGF-BB引

7、起的片狀偽足的形成及細(xì)胞遷移，Ras-ERK軸的活性也受抑，提示SM22α磷酸化介導(dǎo)了PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs片狀偽足的形成和遷移。黃芩苷可通過抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的SM22α磷酸化，從而抑制VSMCs遷移。
　　結(jié)論：
　　1黃芩苷抑制PDGF-BB誘導(dǎo)VSMCs片狀偽足的形成。
　　2 SM22α可通過抑制Ras-ERK軸的活性而抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的VSMCs片狀偽足的形成。
　　3黃芩苷通過抑制