黑?？寡趸煞值姆蛛x純化及活性研究.pdf

1、黑桑是國內(nèi)唯一的22倍體桑種，是新疆地區(qū)特有的黑桑種質(zhì)資源，其不同的染色體倍數(shù)和惡劣的生態(tài)環(huán)境導致其生物學特征特性、各種營養(yǎng)素及其次生代謝產(chǎn)物都有別于其它桑種，對其體內(nèi)的化學成分研究，有利于進一步生理生化、抗逆機理等的研究和開發(fā)利用。細胞正常代謝過程中會產(chǎn)生大量自由基，從而引起機體的衰老，因此，尋找天然、低毒的抗氧化劑成為了目前研發(fā)抗衰老功能性食品和藥品的一個重要部分。研究發(fā)現(xiàn)黑桑具有很好的清除自由基等抗氧化活性。國內(nèi)外對其它桑種的化學

2、成分的活性研究報道較多，但對新疆黑桑以尋求清除自由基等抗氧化活性成分的研究卻鮮有報道。本論文在清除DPPH活性跟蹤下，對黑桑進行了抗氧化活性及成分的研究，其內(nèi)容及結(jié)果如下:
　　1黑?？寡趸钚圆课坏拇_定
　　為了快速分離到抗氧化活性較強的化合物，首先從總多酚、總黃酮含量， DPPH、OH的清除能力和還原能力方面對桑樹器官（枝條、葉片）進行了抗氧化活性的篩選，結(jié)果表明黑桑枝條和葉片醇提物之間具有明顯差異(p＜0.01)。枝條

3、的多酚與黃酮總質(zhì)量比(170.49±1.68mg/g)顯著高于葉片(31.96±0.73mg/g);枝條清除DPPH自由基、OH自由基的能力(IC50分別為0.52±0.03 mg/mL、0.59±0.06 mg/mL)遠遠強于葉片(IC50分別為0.95±0.01 mg/mL、1.17±0.03 mg/mL);桑枝的總還原能力(Vc當量為58.25±0.04 mg/g)也強于桑葉（Vc當量為25.33±1.22 mg/g）。因此，本研

4、究選擇黑桑枝條作為進一步抗氧化研究的材料。
　　用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水對枝條醇提物進行了萃取分段，并對各分段進行了總多酚和總黃酮含量的檢測，各組分的得率分別為2.85％、27.81％、36.63％和31.02％，總多酚、總黃酮的總質(zhì)量比分別為211.75±0.08 mg/g、764.27±1.41 mg/g、137.66±1.53mg/g和120.18±1.20mg/g，各組分間具有極顯著差異(p＜0.01)，這表明石油醚

5、和乙酸乙酯萃取組分的抗氧化活性成分含量最高。
　　運用薄層色譜(TLC)—自顯影技術檢測桑枝醇提物萃取組分的自由基清除活性，結(jié)果顯示:桑枝醇提物、石油醚組分、乙酸乙酯組分相對于正丁醇和水部分，薄層板的紫色背景下具有明顯的黃白色斑點，可以判斷測試樣品中以石油醚組分和乙酸乙酯組分清除DPPH自由基的活性最強，進而對各萃取組分進行了抗氧化活性測試，結(jié)果顯示:清除DPPH自由基和OH自由基能力的關系為:乙酸乙酯萃取組分＞石油醚萃取組分＞正

6、丁醇萃取組分＞剩余水相組分，多酚與黃酮的總量與清除DPPH和OH自由基的能力呈正相關，乙酸乙酯組分清除DPPH自由基的能力與其它組分間具有極顯著差異(p＜0.01)，清除OH自由基的能力與正丁醇和剩余水相組分差異極顯著(p＜0.01);總還原能力的關系為:乙酸乙酯組分＞正丁醇組分＞剩余水相＞石油醚組分，各組分之間差異極顯著(p＜0.01)。因此，確定首先從石油醚與乙酸乙酯分段中進行抗氧化活性成分的分離鑒定。
　　2 DPPH清除活

7、性跟蹤下的抗氧化活性成分的分離
　　應用硅膠、Sephadex LH-20凝膠柱色譜以及重結(jié)晶等分離技術，對石油醚和乙酸乙酯萃取組分中抗氧化活性成分進行分離。本研究建立了一套適用于桑樹抗氧化活性成分的快速檢測及跟蹤分離方法，即TLC-自顯影技術清除DPPH自由基活性、分離純化相結(jié)合的分離方法。該方法能簡潔、快速地從黑桑枝條成千上萬種化合物中分離出具有抗氧化的目標化合物。從18.41 g的石油醚分段中分離得到2個化合物，從175.0

8、0 g乙酸乙酯分段中分離得到9個化合物，運用TLC-自顯影技術、顯色反應、核磁共振儀等對這11個化合物進行了理化性質(zhì)分析、光譜測定及結(jié)構(gòu)解析，確定了其中6個化合物的結(jié)構(gòu)，分別是α-linolenic acid(MN1，脂肪酸，31 mg)，uvaol（MN2，三萜，16 mg），sanggenon M(MN3，黃酮，29 mg)，sanggenonA（MN4，黃酮，18 mg），β-monostearin（MN5，甘油酯，37 mg），

9、isoscopoletin（MN6，香豆素，13 mg）。5個結(jié)構(gòu)未確定的化合物中有2個(MN7:6mg，MN10:9mg)可能為甾醇類化合物，1個(MN8:7mg)可能為黃酮類化合物，1個(MN9:6mg)可能為木質(zhì)素類化合物，1個(MN11:5mg)可能為香豆素類化合物。上述化合物涵蓋了脂肪酸、三萜、黃酮、甘油酯、香豆素、木質(zhì)素、甾醇類化合物，化合物α-linolenic acid和isoscopoletin為首次從黑桑枝條中分離得

10、到，其中isoscopoletin為新疆黑桑的抗炎活性物質(zhì)之一。
　　3黑桑單體化合物抗氧化活性測試
　　將分離得到的各單體化合物，以BHT為對照，測定其對DPPH、OH的清除作用和還原能力，結(jié)果表明:α-linolenic acid(MN1，DPPH: IC50=26.04±0.04μg/mL，OH:39.47±0.08μg/mL)、sanggenon M(MN3,DPPH: IC50=39.87±0.05μg/mL,OH

11、:57.21±0.09μg/mL)、黃酮(MN8,DPPH:IC50=45.63±0.07μg/mL,OH:59.46±0.04μg/mL)、sanggenon A(MN4,DPPH: IC50=54.54±0.03μg/mL，OH: IC50=80.13±0.02μg/mL)、木質(zhì)素(MN9，DPPH: IC50=57.82±0.02μg/mL，OH: IC50=99.92±0.05μg/mL)和isoscopoletin(MN6,D