粘著斑激酶(FAK)在大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎中的作用機(jī)制和藥物干預(yù)后對(duì)其影響的研究.pdf

1、背景:
　　 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種高度致殘的自身免疫性疾病。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎最主要病理特征是關(guān)節(jié)滑膜血管新生和對(duì)關(guān)節(jié)破壞力極強(qiáng)的血管翳形成?；こ衫w維細(xì)胞參與了炎癥和血管新生的整個(gè)過(guò)程，在RA滑膜病理過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用。細(xì)胞的增殖與凋亡相互平衡維持細(xì)胞正常的生理功能和數(shù)量的穩(wěn)定?；こ衫w維細(xì)胞形成血管翳的部位有變異存活因子蛋白的廣泛表達(dá)，而使其不能正常凋亡，有類似腫瘤的性質(zhì)，造成對(duì)骨

2、關(guān)節(jié)的侵襲破壞。
　　 粘著斑激酶(FAK)是一種廣泛表達(dá)的胞漿內(nèi)非受體蛋白酪氨酸激酶，定位于整聯(lián)蛋白聚集處，具有多種功能，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和存活。RA滑膜成纖維細(xì)胞的侵襲性生長(zhǎng)起源于其增殖不受控制。在滑膜的襯里層很難檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，使滑膜成纖維細(xì)胞具有腫瘤樣增殖的特性。由此我們?cè)O(shè)想通過(guò)抑制FAK的表達(dá)來(lái)減少滑膜細(xì)胞的粘附、增生及游走等的發(fā)生，從而達(dá)到治療RA的目的。
　　 本課題通過(guò)建立膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠動(dòng)物模

3、型觀察滑膜細(xì)胞中粘著斑激酶表達(dá)的意義，從細(xì)胞調(diào)亡和細(xì)胞周期調(diào)控的角度探討其在膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠(collagen induced arthritis，CIA)中可能的作用機(jī)制，并通過(guò)觀察CIA大鼠滑膜細(xì)胞在藥物干預(yù)前后FAK表達(dá)水平的變化，探索聯(lián)合治療的作用機(jī)制。以期為臨床聯(lián)合治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 本研究通過(guò)觀察RA動(dòng)物模型CIA大鼠滑膜細(xì)胞粘著斑激酶表達(dá)，并觀察藥物干預(yù)前后FAK表達(dá)水平

4、的變化，探索粘著斑激酶在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中的發(fā)病機(jī)制和聯(lián)合治療的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)的雌性SD大鼠CIA模型，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、CIA模型對(duì)照組、MTX治療組(0.9mg.kg-1.w-1)、CTX間歇治療組(24mg.kg-1.3w-1)、LEF治療組(1.2mg.kg-1.d-1)聯(lián)合治療組（兩兩聯(lián)合MTX:0.9mg.kg-1.w-1、CTX:24mg.kg-1.3w-1、LEF:1.2m

5、g.kg-1.d-1）。進(jìn)行9周體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，初次免疫后3周開(kāi)始給藥。治療過(guò)程中連續(xù)對(duì)大鼠的關(guān)節(jié)炎癥程度進(jìn)行評(píng)分，游標(biāo)卡尺測(cè)量右后肢的足腫脹度。治療6周后全部動(dòng)物處死取材，再經(jīng)固定、脫鈣、包埋，制成切片。然后各組大鼠行HE染色觀察踝關(guān)節(jié)滑膜的組織病理學(xué)改變，進(jìn)一步通過(guò)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組CIA大鼠滑膜細(xì)胞FAK表達(dá)水平，利用HPIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)定平均光密度值。
　　 結(jié)果:
　　 1.CIA大鼠造模成功率達(dá)9

6、1.3％(73/80)。癥狀、影像學(xué)、病理評(píng)估證實(shí)造模成功，為慢性關(guān)節(jié)炎。
　　 2.關(guān)節(jié)炎指數(shù)（AI）：各治療組AI均較模型組明顯改善，聯(lián)合治療組優(yōu)于單藥組MTX、LEF、CTX組(P＜0.05)，各聯(lián)合治療組之間及各單藥組之間無(wú)差異(P＞0.05)；聯(lián)合治療組足腫脹度改善程度最明顯(P＜0.05)。
　　 3.X-ray攝片：各治療組X線改變均較造模組為輕，聯(lián)合治療組優(yōu)于單藥組，各單藥組之間及各聯(lián)合治療組之間無(wú)差別，

7、聯(lián)合治療組X線改變最小。
　　 4.HE關(guān)節(jié)病理改變：CIA造模組大鼠的滑膜層次增多，可達(dá)8層，甚至10余層，排列紊亂，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，軟骨、骨組織嚴(yán)重侵蝕；單藥組MTX、LEF、CTX治療組滑膜炎癥、軟骨及骨組織侵蝕有所減輕；聯(lián)合治療組滑膜炎癥、軟骨及骨組織侵蝕明顯改善。
　　 5.免疫組化法檢測(cè)CIA大鼠各組滑膜組織FAK的表達(dá)：正常對(duì)照組可見(jiàn)少量和未見(jiàn)棕黃色顆粒沉積，F(xiàn)AK表達(dá)呈陰性；造模對(duì)照組滑膜細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量