調(diào)肝方藥對(duì)應(yīng)激性海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簯?yīng)激是指過(guò)強(qiáng)或有害的刺激破壞了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)而引起的機(jī)體非特異性反應(yīng)，適度應(yīng)激對(duì)維持機(jī)體生存起著重要作用，過(guò)度或持久的應(yīng)激將導(dǎo)致一系列病理現(xiàn)象產(chǎn)生。海馬是應(yīng)激反應(yīng)的高位調(diào)節(jié)中樞，過(guò)度應(yīng)激導(dǎo)致海馬損傷，而海馬損傷可導(dǎo)致其對(duì)HPA軸的負(fù)反饋調(diào)節(jié)的消失，引起HPA軸功能亢進(jìn)，進(jìn)一步加重應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致惡性循環(huán)。我們以往的大量的研究表明調(diào)肝方藥加味四逆散(JWSNS)可以調(diào)節(jié)應(yīng)激反應(yīng)，抗慢性應(yīng)激損傷，具有保護(hù)海馬神經(jīng)元的作用。本研究旨

2、在通過(guò)離體實(shí)驗(yàn)研究，建立海馬神經(jīng)元應(yīng)激性損傷模型，進(jìn)一步探討調(diào)肝方藥JWSNS抗應(yīng)激性海馬損傷的作用及機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法： 運(yùn)用大鼠海馬原代無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)，建立高濃度Glu、CORT損傷海馬神經(jīng)元模型，運(yùn)用中藥血清藥理學(xué)方法，探討JWSNS對(duì)海馬神經(jīng)元的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)共分為三個(gè)部分： 1．通過(guò)MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元存活率，探討高濃度Glu、CORT致海馬神經(jīng)元損傷的合理造模濃度，建立海馬神經(jīng)元

3、損傷模型。 2．通過(guò)MTT法檢測(cè)海馬神經(jīng)元存活率探討不同濃度JWSNS含藥血清對(duì)原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元損傷模型的保護(hù)作用。在此基礎(chǔ)上觀察JWSNS對(duì)高濃度Glu、CORT所致海馬神經(jīng)元LDH漏出的影響，采用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)各組海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率，進(jìn)一步研究JWSNS含藥血清對(duì)高濃度Glu、CORT所致海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。 3．用Fura-2熒光探針檢測(cè)海馬神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度；采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)觀察大鼠海馬

4、神經(jīng)元NMDA受體亞基表達(dá)，來(lái)探討JWSNS抗高濃度Glu、CORT損傷海馬神經(jīng)元的可能機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 1．調(diào)肝方藥JWSNS能抗高濃度Glu、CORT引起的原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元損傷，提高海馬神經(jīng)元存活率。 2．調(diào)肝方藥JWSNS能降低高濃度Glu、CORT引起的原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元LDH漏出量，維持細(xì)胞膜的完整性，減少神經(jīng)元的壞死，并降低海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率，起到保護(hù)海馬神經(jīng)元的作用。 3．調(diào)肝方藥JW