調(diào)肝方藥對應激性海馬神經(jīng)元損傷的保護作用研究.pdf

1、實驗目的：應激是指過強或有害的刺激破壞了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)而引起的機體非特異性反應，適度應激對維持機體生存起著重要作用，過度或持久的應激將導致一系列病理現(xiàn)象產(chǎn)生。海馬是應激反應的高位調(diào)節(jié)中樞，過度應激導致海馬損傷，而海馬損傷可導致其對HPA軸的負反饋調(diào)節(jié)的消失，引起HPA軸功能亢進，進一步加重應激反應，導致惡性循環(huán)。我們以往的大量的研究表明調(diào)肝方藥加味四逆散(JWSNS)可以調(diào)節(jié)應激反應，抗慢性應激損傷，具有保護海馬神經(jīng)元的作用。本研究旨

2、在通過離體實驗研究，建立海馬神經(jīng)元應激性損傷模型，進一步探討調(diào)肝方藥JWSNS抗應激性海馬損傷的作用及機制。 實驗方法： 運用大鼠海馬原代無血清培養(yǎng)技術進行海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)，建立高濃度Glu、CORT損傷海馬神經(jīng)元模型，運用中藥血清藥理學方法，探討JWSNS對海馬神經(jīng)元的保護作用。實驗共分為三個部分： 1．通過MTT法檢測海馬神經(jīng)元存活率，探討高濃度Glu、CORT致海馬神經(jīng)元損傷的合理造模濃度，建立海馬神經(jīng)元

3、損傷模型。 2．通過MTT法檢測海馬神經(jīng)元存活率探討不同濃度JWSNS含藥血清對原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元損傷模型的保護作用。在此基礎上觀察JWSNS對高濃度Glu、CORT所致海馬神經(jīng)元LDH漏出的影響，采用流式細胞儀技術檢測各組海馬神經(jīng)元細胞凋亡率，進一步研究JWSNS含藥血清對高濃度Glu、CORT所致海馬神經(jīng)元損傷的保護作用。 3．用Fura-2熒光探針檢測海馬神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度；采用免疫熒光細胞化學技術觀察大鼠海馬

4、神經(jīng)元NMDA受體亞基表達，來探討JWSNS抗高濃度Glu、CORT損傷海馬神經(jīng)元的可能機制。 實驗結論： 1．調(diào)肝方藥JWSNS能抗高濃度Glu、CORT引起的原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元損傷，提高海馬神經(jīng)元存活率。 2．調(diào)肝方藥JWSNS能降低高濃度Glu、CORT引起的原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元LDH漏出量，維持細胞膜的完整性，減少神經(jīng)元的壞死，并降低海馬神經(jīng)元細胞凋亡率，起到保護海馬神經(jīng)元的作用。 3．調(diào)肝方藥JW