肌醇六磷酸對裸鼠皮下SKOV3細胞移植瘤的抑制作用及其機制研究.pdf

1、目的:研究肌醇六磷酸（inositol hexaphosphoric acid,IP6）對裸鼠皮下SKOV3細胞移植瘤的生長、增殖抑制作用及其可能的機制。
　　方法：
　　1.細胞培養(yǎng)：將SKOV3細胞系置于含10％新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。
　　2.裸鼠皮下SKOV3細胞移植瘤模型的建立與實驗分組：將對數(shù)生長期的SKOV3細胞接種于裸鼠的背側(cè)近前肢處的皮下

2、，于種瘤第5天選擇生長出移植瘤且直徑在3～5mm的裸鼠入組實驗，裸鼠隨機分為對照組、IP6低劑量組、IP6高劑量組、順鉑組及IP6低劑量+順鉑聯(lián)合組，每組6只裸鼠。
　　3.實驗藥物的制備：IP6和肌醇的混合物溶于0.9%氯化鈉注射液中，配成含IP6為3mg/ml、6mg/ml的溶液；順鉑溶于0.9%氯化鈉注射液中，配成0.3mg/ml的溶液，均現(xiàn)配現(xiàn)用。
　　4.給藥方法：對照組按0.1ml/g0.9%氯化鈉注射液每天灌胃

3、一次，連續(xù)灌胃28天，前7天同時腹腔注射相同體積0.9%氯化鈉注射液。IP6低劑量組按每天含IP6為300mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天。IP6高劑量組按每天含 IP6為600mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天。順鉑組以每天3mg/kg腹腔注射一次，連續(xù)注射7天。聯(lián)合組按每天含IP6為300mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天，前7天同時腹腔注射3mg/kg順鉑溶液。
　　5.裸鼠一般情況、移植瘤體積、重量及抑瘤率：每天觀察裸鼠

4、精神、飲食、活動及二便情況。用藥第1、7、14、21、28天測量裸鼠體重和移植瘤的最長直徑（a）和最短直徑（b），按公式V（mm3）=ab2/2計算移植瘤體積。停藥24小時終止觀察，處死裸鼠，剝?nèi)×鼋M織并稱重。按公式抑瘤率IR（%）=（對照組瘤重量-實驗組瘤重量）/對照組瘤重量×100%計算抑瘤率。
　　6.免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤組織中cyclinD1蛋白的表達。
　　7.Real Time-PCR法檢測腫瘤組織中miRNA

5、 let-7的表達。
　　8.統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行處理及分析，計量資料用x± s描述，資料滿足正態(tài)分布且方差齊性時，采用單因素方差分析，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義時，均數(shù)間的兩兩比較采用 SNK-q檢驗。不滿足正態(tài)分布或/和方差齊性的計量資料采用秩轉(zhuǎn)換的Kruskal-Wallis H檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.給藥過程順利，用藥兩周后部分裸鼠出現(xiàn)精神萎靡，

6、行動遲緩，飲食量下降，大便雖成型但濕潤度增加的情況，含IP6實驗組較順鉑組裸鼠的一般狀況好。隨著周齡及用藥時間的增加，各組裸鼠重量較前增加，用藥結(jié)束24h后測量各組裸鼠重量，用(-x)± s表示：對照組22.27±2.34g，低劑量組22.42±1.73g，高劑量組22.36±1.67g，順鉑組20.15±0.66g，聯(lián)合組22.00±1.47g，各組裸鼠移植瘤的重量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。用藥期間，每周測量各組裸鼠移植瘤體積

7、，各組裸鼠移植瘤體積較前增長，用藥結(jié)束24h后的移植瘤體積：聯(lián)合組<順鉑組<高劑量組<低劑量組<對照組，各組移植瘤體積差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。用藥結(jié)束24h后測量各組裸鼠移植瘤重量，用(-x)± s表示：對照組3.38±0.017g，低劑量組3.11±0.018g，高劑量組2.83±0.017g，順鉑組2.80±0.040g，聯(lián)合組2.63±0.033g，各組裸鼠移植瘤的重量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。抑瘤率：聯(lián)合組>順

8、鉑組>高劑量組>低劑量組。
　　2.裸鼠移植瘤組織中 cyclinD1蛋白的表達情況：所有分組中均有cyclinD1蛋白的表達，在對照組中高表達，實驗組中低表達，表達量的排列順序為聯(lián)合組<順鉑組<高劑量組<低劑量組<對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.裸鼠移植瘤組織中 miRNA let-7的表達情況：所有分組中均有miRNA let-7表達，在對照組中低表達，實驗組中高表達，表達量的排列順序為聯(lián)合組>順鉑

9、組>高劑量組>低劑量組>對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.與對照組相比，實驗組可以抑制移植瘤的生長。同時發(fā)現(xiàn)，與單用順鉑相比，IP6與順鉑聯(lián)用可以更有效地抑制移植瘤生長，同時降低順鉑引起的副反應(yīng)。
　　2.IP6可能通過抑制cyclinD1蛋白表達，阻止腫瘤細胞周期中的G1/S期轉(zhuǎn)換，抑制腫瘤細胞增殖從而發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　3.IP6可能通過增加miRNA let-7含量而發(fā)揮抑