肌醇六磷酸對(duì)裸鼠皮下SKOV3細(xì)胞移植瘤的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究肌醇六磷酸（inositol hexaphosphoric acid,IP6）對(duì)裸鼠皮下SKOV3細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng)、增殖抑制作用及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　1.細(xì)胞培養(yǎng)：將SKOV3細(xì)胞系置于含10％新生牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。
　　2.裸鼠皮下SKOV3細(xì)胞移植瘤模型的建立與實(shí)驗(yàn)分組：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV3細(xì)胞接種于裸鼠的背側(cè)近前肢處的皮下

2、，于種瘤第5天選擇生長(zhǎng)出移植瘤且直徑在3～5mm的裸鼠入組實(shí)驗(yàn)，裸鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、IP6低劑量組、IP6高劑量組、順鉑組及IP6低劑量+順鉑聯(lián)合組，每組6只裸鼠。
　　3.實(shí)驗(yàn)藥物的制備：IP6和肌醇的混合物溶于0.9%氯化鈉注射液中，配成含IP6為3mg/ml、6mg/ml的溶液；順鉑溶于0.9%氯化鈉注射液中，配成0.3mg/ml的溶液，均現(xiàn)配現(xiàn)用。
　　4.給藥方法：對(duì)照組按0.1ml/g0.9%氯化鈉注射液每天灌胃

3、一次，連續(xù)灌胃28天，前7天同時(shí)腹腔注射相同體積0.9%氯化鈉注射液。IP6低劑量組按每天含IP6為300mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天。IP6高劑量組按每天含 IP6為600mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天。順鉑組以每天3mg/kg腹腔注射一次，連續(xù)注射7天。聯(lián)合組按每天含IP6為300mg/kg灌胃一次，連續(xù)灌胃28天，前7天同時(shí)腹腔注射3mg/kg順鉑溶液。
　　5.裸鼠一般情況、移植瘤體積、重量及抑瘤率：每天觀察裸鼠

4、精神、飲食、活動(dòng)及二便情況。用藥第1、7、14、21、28天測(cè)量裸鼠體重和移植瘤的最長(zhǎng)直徑（a）和最短直徑（b），按公式V（mm3）=ab2/2計(jì)算移植瘤體積。停藥24小時(shí)終止觀察，處死裸鼠，剝?nèi)×鼋M織并稱重。按公式抑瘤率IR（%）=（對(duì)照組瘤重量-實(shí)驗(yàn)組瘤重量）/對(duì)照組瘤重量×100%計(jì)算抑瘤率。
　　6.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)腫瘤組織中cyclinD1蛋白的表達(dá)。
　　7.Real Time-PCR法檢測(cè)腫瘤組織中miRNA

5、 let-7的表達(dá)。
　　8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及分析，計(jì)量資料用x± s描述，資料滿足正態(tài)分布且方差齊性時(shí)，采用單因素方差分析，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)，均數(shù)間的兩兩比較采用 SNK-q檢驗(yàn)。不滿足正態(tài)分布或/和方差齊性的計(jì)量資料采用秩轉(zhuǎn)換的Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.給藥過程順利，用藥兩周后部分裸鼠出現(xiàn)精神萎靡，

6、行動(dòng)遲緩，飲食量下降，大便雖成型但濕潤(rùn)度增加的情況，含IP6實(shí)驗(yàn)組較順鉑組裸鼠的一般狀況好。隨著周齡及用藥時(shí)間的增加，各組裸鼠重量較前增加，用藥結(jié)束24h后測(cè)量各組裸鼠重量，用(-x)± s表示：對(duì)照組22.27±2.34g，低劑量組22.42±1.73g，高劑量組22.36±1.67g，順鉑組20.15±0.66g，聯(lián)合組22.00±1.47g，各組裸鼠移植瘤的重量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。用藥期間，每周測(cè)量各組裸鼠移植瘤體積

7、，各組裸鼠移植瘤體積較前增長(zhǎng)，用藥結(jié)束24h后的移植瘤體積：聯(lián)合組<順鉑組<高劑量組<低劑量組<對(duì)照組，各組移植瘤體積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。用藥結(jié)束24h后測(cè)量各組裸鼠移植瘤重量，用(-x)± s表示：對(duì)照組3.38±0.017g，低劑量組3.11±0.018g，高劑量組2.83±0.017g，順鉑組2.80±0.040g，聯(lián)合組2.63±0.033g，各組裸鼠移植瘤的重量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。抑瘤率：聯(lián)合組>順

8、鉑組>高劑量組>低劑量組。
　　2.裸鼠移植瘤組織中 cyclinD1蛋白的表達(dá)情況：所有分組中均有cyclinD1蛋白的表達(dá)，在對(duì)照組中高表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中低表達(dá)，表達(dá)量的排列順序?yàn)槁?lián)合組<順鉑組<高劑量組<低劑量組<對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.裸鼠移植瘤組織中 miRNA let-7的表達(dá)情況：所有分組中均有miRNA let-7表達(dá)，在對(duì)照組中低表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組中高表達(dá)，表達(dá)量的排列順序?yàn)槁?lián)合組>順鉑

9、組>高劑量組>低劑量組>對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組可以抑制移植瘤的生長(zhǎng)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，與單用順鉑相比，IP6與順鉑聯(lián)用可以更有效地抑制移植瘤生長(zhǎng)，同時(shí)降低順鉑引起的副反應(yīng)。
　　2.IP6可能通過抑制cyclinD1蛋白表達(dá)，阻止腫瘤細(xì)胞周期中的G1/S期轉(zhuǎn)換，抑制腫瘤細(xì)胞增殖從而發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　3.IP6可能通過增加miRNA let-7含量而發(fā)揮抑