同種異體神經橋接復合體修復兔坐骨神經缺損免疫排斥的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗將體外分離、培養(yǎng)、提純的胎兔雪旺細胞種植到經化學處理的脫細胞異體神經段中制成神經橋接復合體。然后將橋接復合體移植到成年兔缺損的坐骨神經，觀察有無免疫排斥反應，從而證實神經橋接復合體的抗原性小或無，為臨床應用同種異體神經修復周圍神經損傷提供理論基礎。 方法：1.種植雪旺細胞的去細胞神經移植物的構建：1.1雪旺細胞培養(yǎng)：取懷孕28天的新西蘭白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后迅速取胎兔。在手術顯微鏡下無菌條件下取胎兔的雙側坐骨神

2、經，盡量剝除神經外膜及束膜，應用雙酶(trypsin/collagenase)反復消化法與差速貼壁法分離純化和培養(yǎng)雪旺細胞。1.2 去細胞神經橋接體制備：取成年健康新西蘭白兔一只，分別自梨狀肌下緣水平以遠切取雙側坐骨神經，作為異體神經的來源。用TritoX-100進行神經萃取。1.3 取雪旺細胞與去細胞同種異體神經體外共同培養(yǎng)：制備去細胞同種異體神經移植物，顯微注射法將體外培養(yǎng)的雪旺細胞與去細胞神經移植物共培養(yǎng)。2.術前抽取10只成年健

3、康的新西蘭兔靜脈血進行T淋巴細胞亞群檢測。3.種植雪旺細胞的去細胞神經移植物橋接兔坐骨神經缺損：取前述10只成年兔用速眠欣(0.1ml/kg)耳緣靜脈麻醉后，消毒，在左側臀部至大腿的弧形切口，顯露出坐骨神經后，造成坐骨神經20mm的缺損。 取上述制備的復合體用8/0無損傷線端端吻合，縫合臀大肌及皮膚。4.術后觀察兔的精神狀態(tài)，飲食活動，傷口愈合情況。5.組織形態(tài)學觀察：觀察術后5日、12日局部炎性浸潤情況。6.術后5日及12日進

4、行兔靜脈血T淋巴細胞亞群檢測。7統(tǒng)計分析：采用t檢驗。 結果：兔術后精神狀態(tài)佳，飲食良好，有跛行，傷口無感染。術后5日與12日取標本HE染色觀察有少量炎性細胞浸潤，無細胞變性壞死，無神經結構破壞及神經基底膜管塌陷，無移植神經中心性壞死、纖維瘢痕化。移植前及移植后5日與12日外周血中CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細胞比例無變化(P>0.05,P>0.05)，同時CD4<'+>/CD8<'+>值也無升高(P>0.05)。