優(yōu)化法去細(xì)胞神經(jīng)移植修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損的研究.pdf

1、周圍神經(jīng)損傷后，如果游離神經(jīng)斷端仍達(dá)不到無(wú)張力縫合，則需進(jìn)行自體神經(jīng)移植，它被認(rèn)為是修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的金標(biāo)準(zhǔn)。但自體神經(jīng)來(lái)源有限并增加手術(shù)部位和創(chuàng)傷，造成來(lái)源神經(jīng)支配區(qū)的功能障礙，所以需要等效于自體神經(jīng)的理想神經(jīng)移植物。同種異體或異種新鮮神經(jīng)移植會(huì)因免疫排斥反應(yīng)而失敗，許旺細(xì)胞及組織間隙細(xì)胞、髓鞘是排斥反應(yīng)的主要標(biāo)靶，其它成分抗原性則非常弱。因此去除細(xì)胞及髓鞘等成分就能極大地降低其免疫原性，有效抑制免疫排斥反應(yīng)。去細(xì)胞的方法較多，其中應(yīng)

2、用較多的有熱法及化學(xué)法。但前者只是殺死細(xì)胞并不能去除細(xì)胞殘留物從而不能較好地消除免疫原性，后者雖然能較徹底去除細(xì)胞碎片，但卻對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)損傷較大，破壞了移植物的空間結(jié)構(gòu)，而移植物的空間結(jié)構(gòu)及某些天然組織蛋白對(duì)促進(jìn)神經(jīng)再生非常重要。針對(duì)此問(wèn)題，Hudson等人開發(fā)了優(yōu)化的去細(xì)胞方法。應(yīng)用此優(yōu)化方法處理同種異體神經(jīng)，既清除了細(xì)胞、髓鞘及其崩解碎片，基本消除了神經(jīng)移植物抗原性，同時(shí)很好地保留了神經(jīng)的基管膜及板層結(jié)構(gòu)而成為神經(jīng)纖維再生的良好支架

3、，使其具有與自體神經(jīng)近似的引導(dǎo)神經(jīng)再生的功能。然而其體內(nèi)研究仍較初步且未對(duì)術(shù)后動(dòng)物的功能恢復(fù)情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。而臨床上同種異體神經(jīng)來(lái)源也很有限，運(yùn)用異種神經(jīng)則不僅能解決來(lái)源問(wèn)題，且不會(huì)產(chǎn)生倫理學(xué)問(wèn)題。Hudson等人并未對(duì)優(yōu)化法處理的異種神經(jīng)移植修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損后的抗免疫排斥和促神經(jīng)再生能力進(jìn)行研究，若本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)優(yōu)化法處理的異種神經(jīng)修復(fù)神經(jīng)缺損的能力與自體神經(jīng)和去細(xì)胞同種異體神經(jīng)相似將具有較大的臨床意義。 因此，本研究通過(guò)應(yīng)用優(yōu)

4、化去細(xì)胞（Optimized acellular，OA）方法處理的同種異體（大鼠）及異種（兔）神經(jīng)移植物移植修復(fù)大鼠坐骨神經(jīng)缺損，術(shù)后檢測(cè)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物移植物局部的免疫排斥情況、患肢功能恢復(fù)及神經(jīng)再生情況，并將三種不同移植物的修復(fù)結(jié)果相互對(duì)比，來(lái)觀察優(yōu)化去細(xì)胞方法抑制免疫排斥、促神經(jīng)再生及功能恢復(fù)的有效性，探討同種異體及異種神經(jīng)移植作為自體神經(jīng)移植替代療法的可能性。 首先，進(jìn)行神經(jīng)移植物制備及神經(jīng)移植手術(shù)。參照Hudson等的優(yōu)化去細(xì)

5、胞方法處理所取兔臂叢神經(jīng)分支和大鼠坐骨神經(jīng)，然后分別移植修復(fù)大鼠1cm坐骨神經(jīng)缺損，以自體神經(jīng)移植和新鮮兔、大鼠神經(jīng)移植作為對(duì)照。然后，分別于術(shù)后1個(gè)月和3個(gè)月行大體觀察、坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（sciatic functional index,SFI）測(cè)量、神經(jīng)電生理檢測(cè)和組織學(xué)觀察。 研究結(jié)果顯示：術(shù)后1個(gè)月，自體神經(jīng)、OA異體神經(jīng)和OA異種神經(jīng)移植組動(dòng)物的坐骨神經(jīng)功能恢復(fù)相似，大體觀察亦無(wú)顯著差異，但均優(yōu)于新鮮神經(jīng)移植組。電生理

6、檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明三組動(dòng)物移植神經(jīng)均已恢復(fù)電傳導(dǎo)能力，在傳導(dǎo)速度上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但均未恢復(fù)到正常神經(jīng)水平。組織學(xué)觀察則顯示三組再生神經(jīng)纖維均連續(xù)性良好，雪旺氏細(xì)胞在數(shù)量、形態(tài)和排列等方面無(wú)明顯差異。巨噬細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞免疫組化染色顯示它們?cè)谌旧?yáng)性面積百分比上無(wú)明顯差異，卻顯著低于新鮮神經(jīng)移植組，直觀地證明了優(yōu)化去細(xì)胞方法有效抑制宿主免疫排斥反應(yīng)的能力。3個(gè)月取材與1個(gè)月取材時(shí)相比，移植段神經(jīng)的大體外觀、電生理及組織學(xué)觀察結(jié)果均無(wú)明顯

7、差異，但坐骨神經(jīng)功能指數(shù)卻明顯優(yōu)于后者，可能是因?yàn)樾g(shù)后1個(gè)月時(shí)，再生神經(jīng)纖維已經(jīng)通過(guò)移植段神經(jīng)并長(zhǎng)入遠(yuǎn)端，神經(jīng)電傳導(dǎo)能力已經(jīng)恢復(fù)，故與3個(gè)月時(shí)相比，電生理及組織學(xué)觀察結(jié)果無(wú)顯著差異，如移植物中段軸突密度等指標(biāo)。而隨著時(shí)間推移，神經(jīng)纖維向遠(yuǎn)端延伸，重建運(yùn)動(dòng)終板等結(jié)構(gòu)，恢復(fù)對(duì)肌肉的支配，因此坐骨神經(jīng)功能指數(shù)優(yōu)于1個(gè)月時(shí)。 由于用天然神經(jīng)代替人工材料移植修復(fù)周圍神經(jīng)缺損具有許多先天性優(yōu)點(diǎn)，如完全天然的空間結(jié)構(gòu)，以及軸突生長(zhǎng)時(shí)會(huì)對(duì)神經(jīng)移

8、植物內(nèi)的基膜管等具有傾向性等，因此，優(yōu)化去細(xì)胞方法處理的天然神經(jīng)移植物不僅有效解決了宿主免疫排斥的問(wèn)題，還能提供較理想的促神經(jīng)再生能力。 本研究表明：用此方法處理的同種異體神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損效果較好，有望代替應(yīng)用受限的自體神經(jīng)。而此法處理的異種神經(jīng)移植物則可以比擬自體神經(jīng)和同樣方法處理的同種異體神經(jīng)移植物，且在供體來(lái)源和倫理學(xué)等方面甚至優(yōu)于后兩者，因此臨床應(yīng)用異種神經(jīng)移植物修復(fù)周圍神經(jīng)缺損，特別是大段、多段或神經(jīng)叢缺損是可行的