稻瘟病菌中一個假定的Rab族蛋白RAB8之功能分析.pdf

1、Rab族蛋白是小G蛋白Ras家族最大的亞家族，研究表明它主要參與細(xì)胞內(nèi)的泡囊運(yùn)輸，調(diào)節(jié)生物體內(nèi)各種蛋白在細(xì)胞內(nèi)外的正確運(yùn)輸和分配，在真菌的生長發(fā)育過程中起到關(guān)鍵的作用。 本研究試圖了解稻瘟病菌中Rab族蛋白的功能。首先，利用稻瘟病菌的數(shù)據(jù)庫和相關(guān)生物信息學(xué)軟件分析，結(jié)果表明在稻瘟病菌基因組中預(yù)測有10個Rab蛋白亞家族成員，這些Rab亞家族成員都具有其保守的結(jié)構(gòu)域并且與其它物種間的Rab族蛋白存在著高度的同源性。然后，根據(jù)Rab

2、家族成員的核酸序列設(shè)計引物，利用同源重組的原理構(gòu)建基因敲除突變體，并對其進(jìn)行Southern雜交和RT-PCR驗(yàn)證，結(jié)果得到一個具有代表性的Rab亞家族成員Rab8(Mgg06135.5)的敲除突變體。對該突變體進(jìn)行表型分析，發(fā)現(xiàn)該突變體的菌絲較野生菌株有少許變粗，菌絲生長速度明顯減慢；產(chǎn)孢量顯著降低，分生孢子形態(tài)正常但有少許膨大，仍可以正常萌發(fā)并成功侵入洋蔥表皮細(xì)胞；用其孢子液接種水稻葉片，病斑數(shù)顯著減少，病情指數(shù)降低，致病能力減弱。