RSUME、HIF-1α-VEGF-A通路與垂體腺瘤侵襲的相關(guān)性.pdf

1、目的：
　　研究RWD結(jié)構(gòu)小泛素化增強(qiáng)子（RWD containing sumoylation enhancer，RSUME）通過增強(qiáng)小泛素相關(guān)修飾因子-1（small ubiquitin related modifiers-1，SUMO-1）表達(dá)，穩(wěn)定缺氧誘導(dǎo)因子（hypo xia-ind uc ib le factor1-a lp ha，HIF-1α）/血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth

2、factor，VEGF）通路在垂體腺瘤中的作用及侵襲的相關(guān)性。進(jìn)一步探討RSUME、SUMO-1、HIF-1α/VEGF與垂體腺瘤侵襲性生物學(xué)行為的關(guān)系，為垂體腺瘤抗血管新生，降低垂體腺瘤侵襲提供新的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、研究RSUME、SUMO-1、HIF-1α、VEGF-A在垂體腺瘤中的表達(dá)及垂體腺瘤侵襲的相關(guān)性
　　通過影像學(xué)檢查及術(shù)中所見，并依據(jù)Hardy-Wilson以及Knosp標(biāo)準(zhǔn)將垂體腺瘤劃分

3、為侵襲性垂體腺瘤組以及非侵襲性垂體腺瘤組。采用免疫組化、wes ter n blo t、qPC R檢測49例非侵襲性垂體腺瘤、34例侵襲性垂體腺瘤以及9例正常垂體包膜中RSUME、SUMO-1、HIF-1α、VEGF-A在蛋白質(zhì)和mRNA兩個(gè)水平上的表達(dá)，并進(jìn)行比較，同時(shí)行相關(guān)性分析。
　　2、研究RSUME通過HIF-1α/VEGF通路在垂體腺瘤中的作用的機(jī)制
　　通過RSUME小干擾RNA（small interferi

4、ng RNA，siRNA）以及氯化鈷干擾小鼠垂體腺瘤 AtT-20細(xì)胞，行實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測 RSUME、HIF-1α、VEGF-A的mRNA水平的改變，蛋白質(zhì)印跡法檢測SUMO-1、HIF-1α、VEGF-A蛋白水平的改變，并用Transwell及M TT法檢測垂體腺瘤侵襲的改變。
　　結(jié)果：
　　1、垂體腺瘤中RSUME、SUMO-1、HIF-1α、VEGF-A的表達(dá)及相關(guān)性
　　（1）侵襲性垂體腺瘤中RSU

5、ME、HIF-1α、VEGF-A的mRNA表達(dá)水平及SUMO-1、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表達(dá)水平明顯高于非侵襲性垂體腺瘤及正常垂體包膜組織（p＜0.05）。
　?。?）RSUM E通過促進(jìn)SUMO-1與 HIF-1α的表達(dá)顯著正相關(guān)（r=0.687，p<0.05），HIF-1α的表達(dá)與VEGF-A顯著正相關(guān)（r=0.773，p<0.05）。
　　2、RSUME通過HIF-1α/VEGF通路在垂體腺瘤中的作用的機(jī)制<

6、br>　?。?）氯化鈷缺氧處理小鼠垂體腺瘤AtT-20細(xì)胞后，RSUME mRNA表達(dá)水平明顯升高（p＜0.05），而HIF-1α mRNA的表達(dá)水平無明顯改變（p＞0.05）；RSUME及HIF-1α蛋白的表達(dá)水平明顯升高。
　　（2）HIF-1α siRNA轉(zhuǎn)染AtT-20細(xì)胞后，與未轉(zhuǎn)染對照組及NC組相比，HIF-1α siRNA轉(zhuǎn)染組的mRNA及蛋白水平明顯下降（p＜0.05）；然而 RSUME mRNA和蛋白表達(dá)水平在三

7、組之間均無明顯變化。
　　（3）RSUME siRNA轉(zhuǎn)染AtT-20細(xì)胞后，與未轉(zhuǎn)染對照組及NC組相比，RSUME siRNA轉(zhuǎn)染組的mRNA水平明顯下降（p＜0.05），HIF-1α mRNA的表達(dá)水平三組之間無明顯變化；蛋白水平方面，與未轉(zhuǎn)染對照組及NC組相比，RSUM E s iRN A轉(zhuǎn)染組的蛋白水平明顯下降（p＜0.05），HIF-1α蛋白的表達(dá)水平也隨著相應(yīng)下降（p＜0.05）。
　　（4）Transwell侵