人類調(diào)節(jié)性γδT細(xì)胞的體外誘導(dǎo)、表型鑒定、免疫調(diào)節(jié)活性及與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的相關(guān)性研究.pdf

1、γδ T細(xì)胞是不同于αβ T細(xì)胞的一群T淋巴細(xì)胞,其表面表達(dá)由γ鏈和δ鏈組成的T細(xì)胞受體(Tcell receptor,TCR),在抗原識(shí)別和免疫應(yīng)答中處于特殊的地位。由于γδTCR的有限多樣性及其抗原識(shí)別的MHC非限制性,γδ T細(xì)胞一直被視為固有免疫細(xì)胞。γδ T細(xì)胞處于抗腫瘤和感染的第一線,參與了機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫監(jiān)視和對(duì)病原體侵襲的防御反應(yīng)。然而,除了抗感染和抗腫瘤的作用外,越來越多的證據(jù)表明,γδ T細(xì)胞可能也存在免疫調(diào)節(jié)作用。

2、為了全面了解γδ T細(xì)胞的生物學(xué)功能,探索γδT細(xì)胞調(diào)節(jié)亞群的存在形式、作用方式和臨床意義,本研究以自身免疫性疾病為研究模型,通過體外誘導(dǎo)的方式對(duì)γδT細(xì)胞的調(diào)節(jié)功能進(jìn)行了研究。
　　 自身免疫性疾病是與免疫系統(tǒng)自身免疫耐受和平衡密切相關(guān)的一類疾病,根據(jù)疾病累及的范圍可被分為局部性疾病和全身性疾病,但臨床上以全身性疾病為主,多器官多系統(tǒng)均會(huì)受累。目前對(duì)自身免疫性疾病的治療缺乏針對(duì)性,且毒副作用顯著,因此,探尋疾病發(fā)生的免疫學(xué)相關(guān)

3、機(jī)制,進(jìn)而找到針對(duì)病因的有效治療方案,是多數(shù)自身免疫性疾病治療面臨的首要問題。
　　 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)是臨床上常見的一種自身免疫性疾病,以免疫系統(tǒng)自身紊亂和多系統(tǒng)受累為主要表現(xiàn)。
　　 首先,本研究以SLE患者與健康志愿者外周血中γδ T細(xì)胞數(shù)量、亞群組成和功能分布的差異等方面為切入點(diǎn),初步探討了γδ T細(xì)胞在SLE患者發(fā)病過程中所發(fā)揮的作用。與健康志愿者

4、相比,SLE患者外周血中γδ T細(xì)胞的比例顯著下降,其中以Vδ2亞群的減少為主,而Vδ1和Vδ3兩群細(xì)胞無明顯變化；另外,在γδ T細(xì)胞按照CD27和CD45RA表達(dá)情況進(jìn)行分類后,產(chǎn)生的四個(gè)功能亞群中,表型為CD27+CD45RA-的中心性記憶細(xì)胞亞群明顯減少,提示了該群細(xì)胞與SLE的相關(guān)性。
　　 隨后,為了證明人類調(diào)節(jié)性γδ T細(xì)胞的存在并研究其功能及作用機(jī)制,我們依照CD4調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell

5、s,Tregs)的體外誘導(dǎo)條件,進(jìn)行了對(duì)人外周血γδ T細(xì)胞的體外誘導(dǎo)。在重組的人白細(xì)胞介素-2(Interleukin2,IL-2)以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforming growth factorβ,TGF—β)和/或白細(xì)胞介素-10(Interleukin10,IL—10)存在的條件下,以抗TCRγδ抗體刺激對(duì)人外周血γδ T細(xì)胞進(jìn)行了體外誘導(dǎo)。誘導(dǎo)后的γδ T細(xì)胞與經(jīng)典的CD4 Treg相似,可表達(dá)Treg標(biāo)志性轉(zhuǎn)錄因子

6、Foxp3,表現(xiàn)出對(duì)CD4 T細(xì)胞增殖的抑制作用,其中Vδ1細(xì)胞是發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)活性的主要細(xì)胞亞群。為進(jìn)一步研究該群細(xì)胞的表型和作用機(jī)制,尋找到理想的調(diào)節(jié)性γδ T細(xì)胞的分子標(biāo)志物,我們以胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3的表達(dá)為標(biāo)準(zhǔn),檢測(cè)與Foxp3表達(dá)相匹配的細(xì)胞表面分子。通過對(duì)細(xì)胞表面多個(gè)調(diào)節(jié)功能相關(guān)的分子表達(dá)水平的分析,發(fā)現(xiàn)Foxp3主要表達(dá)于CD27+Vδ1細(xì)胞中,且CD27+細(xì)胞較CD27-細(xì)胞具有更明顯的抑制CD4 T細(xì)胞增殖的作用。盡

7、管如此,部分CD27+細(xì)胞并不表達(dá)Foxp3,即CD27表達(dá)并不完全等同于Foxp3的表達(dá),因此,我們進(jìn)一步研究了經(jīng)典的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的標(biāo)志分子CD25在Vδ1細(xì)胞中與Foxp3兩者以及CD25、CD27和Foxp3三者表達(dá)的相關(guān)性。最終,我們確定調(diào)節(jié)性γδ T細(xì)胞具有Vδ1+CD27+CD25+的表型,且其對(duì)CD4 T細(xì)胞增殖的抑制作用主要是通過細(xì)胞直接接觸的方式實(shí)現(xiàn)的。
　　 綜上所述,本研究初步探討了γδ T細(xì)胞在自身免疫性