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文檔簡介
1、目的:應用RNA干擾技術體外抑制大鼠MuRF1基因表達的效果,以期篩選出針對MuRF1基因抑制效果最佳的siRNA重組質粒。
方法:根據(jù)大鼠MuRF1基因的mRNA序列,設計四組干擾序列,即siRNAMuRF1-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,利用lipofactamine2000轉染試劑將siRNA重組質粒轉染大鼠成肌細胞系L6,于轉染后48h與72h,采用實時定量PCR和Westernblot或免疫印跡檢測其對MuRF1表達的抑制效果。<
2、br> 結果:1.實時定量PCR顯示四組干擾質粒MuRF1Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ對基因MuRF1的mRNA的抑制率在轉染后48h分別為67﹪、31﹪、11﹪,20﹪,不同干擾序列的抑制效果有差異(F=4.527,P=0.024);72h分別為79﹪、59﹪、50﹪和61﹪,不同干擾序列的抑制效果有差異(F=19.088,P<0.001),與48h相比,抑制效應更為明顯,但以siRNAMuRF1-Ⅰ的抑制效果最為明顯(t=8.201,P<0.0
3、01)。2.使用Western印跡灰度分析顯示四組干擾序列對基因MuRF1的蛋白的抑制率在轉染后48h分別為61﹪、40﹪、9﹪,15﹪,不同干擾序列的抑制效果有差異(F=4.286,P=0.028);72h分別為70﹪、54﹪、30﹪,46﹪,不同干擾序列的抑制效果有差異(F=3.731,P=0.042);與48h相比,MuRFl-Ⅰ、MuRFl-Ⅱ抑制效應與對照組相比有顯著性差異(tⅠ=3.256,P=0.009;t=2.512,P
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