RNA干擾介導(dǎo)蛋白酶體亞基RC2和泛素連接酶MAFbx基因下調(diào)延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的基礎(chǔ)研究.pdf

1、舭燁蚺L柳觸(剌L，Y955437復(fù)旦大學(xué)博士研究生學(xué)位論文RNA干擾介導(dǎo)蛋白酶體亞基RC2和泛素連接酶MAFbx基因下調(diào)延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的基礎(chǔ)研究RNAi—mediatedGeneDownregulationofProteasomeSubunitRC2andUbiquitinLigaseMAFbxCanAmeliorateRatDenervatedSkeletalMuscleAtrophy研究生馮勇專業(yè)外科學(xué)手外科導(dǎo)師張高孟教授導(dǎo)

2、師組成員王濤教授張麗銀教授李繼峰劃教授本課題受國家自然科學(xué)基金資助(項(xiàng)目編號(hào)：30371463)復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文(中文摘要)RNA干擾介導(dǎo)蛋白酶體亞基RC2和泛素連接酶liAFbx基因下調(diào)延緩失神經(jīng)骨骼肌萎縮的基礎(chǔ)研究博士研究生馮勇導(dǎo)師張高孟教授臂叢神經(jīng)下干、正中神經(jīng)、尺神經(jīng)損傷后導(dǎo)致的手內(nèi)在肌萎縮的治療是周圍神經(jīng)領(lǐng)域的一大難題，手內(nèi)肌功能的喪失實(shí)質(zhì)上意味著上肢核心功能的喪失，給患者及其家庭和社會(huì)帶來了沉重的精神和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此，加

3、強(qiáng)基礎(chǔ)研究、揭示肌萎縮本質(zhì)、尋找有效方法有著重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。骨骼肌在失神經(jīng)支配后早期出現(xiàn)的快速萎縮的事實(shí)，從蛋白代謝的角度分析，就是骨骼肌中蛋白代謝的動(dòng)態(tài)平衡被打破了，蛋白降解占據(jù)了主導(dǎo)地位，經(jīng)過近十幾年的基礎(chǔ)研究，已經(jīng)明確了泛素一蛋白酶體蛋白水解途徑在這一過程中占具著主導(dǎo)地位，失神經(jīng)后，其相關(guān)基因表達(dá)上調(diào)，活性增強(qiáng)，導(dǎo)致骨骼肌中的蛋白降解加速，最終出現(xiàn)骨骼肌的萎縮。RNA干擾是一種新的阻抑基因表達(dá)的技術(shù)，通過導(dǎo)入一段與內(nèi)源性靶基

4、因同源的雙鏈RNA序列，可以特異性的使靶基因的mRNA降解，進(jìn)而使靶基因編碼的蛋白表達(dá)缺失或下調(diào)，受此啟發(fā)，本課題嘗試采用RNA干擾技術(shù)來下調(diào)泛素一蛋白酶體途徑中編碼蛋白酶體亞基RC2和泛素連接酶MAFbx基因的表達(dá)，借此抑制失神經(jīng)后骨骼肌中蛋白的高分解代謝，探討其延緩骨骼肌萎縮的療效，為失神經(jīng)骨骼肌萎縮尋找新的治療方法。第一部分蛋白酶體亞基Rc2和泛素連接酶姒Fbx基因在失神經(jīng)骨骼肌中的變化規(guī)律及其意義目的研究蛋白酶體亞基RC2和泛素

5、連接酶MAFbx兩基因在失神經(jīng)骨骼肌中的變化規(guī)律及其意義，為RNAi介導(dǎo)的基因治療提供干預(yù)時(shí)間點(diǎn)。方法選用雌性SD大N48只，建立右下肢腓腸肌失神經(jīng)支配模型，隨機(jī)分為8組，每組6只，術(shù)后0天為對(duì)照組，術(shù)后l、2、3、4、5、6、14天為實(shí)驗(yàn)組，采用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)RC2和MAFbx基因mRNA在失神經(jīng)后不同時(shí)間點(diǎn)的變化規(guī)律，相對(duì)定量法分析其表達(dá)變化；使用western印跡檢測(cè)Rc2在蛋白水平的變化規(guī)律，并對(duì)其灰度進(jìn)行半定量分析。結(jié)果1