姜黃素的提取純化、脂質(zhì)體的制備和組織分布的研究.pdf

1、姜黃素是從姜科植物姜黃Curcuma longa L.中提取的一種酚類(lèi)化合物，被認(rèn)為是中藥姜黃的主要活性成分，具有抗炎、抗氧化、降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤、抗HIV病毒、神經(jīng)保護(hù)等作用，且毒性很低。近年國(guó)內(nèi)外的研究表明，姜黃素可影響腫瘤發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)階段(始發(fā)、促進(jìn)和演進(jìn))，并可通過(guò)抑制血管生成達(dá)到抗腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的目的。作為一種具有良好發(fā)展前景的抗癌藥物，姜黃素在腫瘤預(yù)防和治療方面的作用已經(jīng)引起人們的重視，成為研究熱點(diǎn)。但是，姜

2、黃素難溶于水，在體外容易被氧化，在體內(nèi)生物利用度低，在腸道吸收過(guò)程中發(fā)生轉(zhuǎn)化，極少以原形吸收入血，目前也沒(méi)有穩(wěn)定性較好的藥物劑型?？诜慕S素大部分在胃腸道內(nèi)被代謝而失活，被吸收到血循環(huán)中的量很少，因此給姜黃素的臨床應(yīng)用，尤其在腫瘤治療中的應(yīng)用帶來(lái)了一定的難度。脂質(zhì)體包裹技術(shù)可以解決脂溶性藥物不易溶于水的難題，提高易氧化藥物在體內(nèi)外的穩(wěn)定性，降低被包封藥物的毒性，增加藥物被增殖旺盛的癌細(xì)胞的攝取量，是抗腫瘤藥物的理想載體。本課題研究姜黃

3、素的提取，分離，純化，姜黃素脂質(zhì)體的制備及其在動(dòng)物體內(nèi)的組織分布行為，旨在探討以脂質(zhì)體作為載體制成能適合于靜脈或口服液用的姜黃素新劑型的可能性，為姜黃素應(yīng)用于腫瘤治療方面的深入研究提供一定理論基礎(chǔ)。 (一)實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果 1.采用高效液相法(HPIC)測(cè)定姜黃素的含量，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并進(jìn)行方法學(xué)考察。 2.對(duì)姜黃素的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，研究表明姜黃素在pH<5.5，溫度在30℃以下時(shí)，姜黃素的含量基本沒(méi)有變化，當(dāng)溫

4、度高于40℃，姜黃素的含量明顯下降。 3.本文用滲漉法提取姜黃中的姜黃素，確定姜黃素的最佳提取工藝為：pH=5.5，20倍的體積，75％的乙醇，浸泡10小時(shí)后，調(diào)整滲漉流速為1mL·min-1進(jìn)行滲漉。 4.本文對(duì)DA201，DS401，D101，D101A，DM301五種大孔樹(shù)脂進(jìn)行篩選結(jié)果表明，DM301樹(shù)脂對(duì)姜黃素的吸附和解吸附率都較好，確定DM301為姜黃素的純化樹(shù)脂。本文對(duì)DM301大孔樹(shù)脂純化條件的進(jìn)行研究，

5、確定了最佳純化條件。 5.用硅膠柱分離純化姜黃素，成功得到單體。 6.選取薄膜法、逆相蒸發(fā)法、乙醇注入法、乙醚注入法和熔融法制備姜黃素脂質(zhì)體，以包封率為主要指標(biāo)，并結(jié)合顯微鏡觀(guān)察，確定薄膜法為最優(yōu)制備方法。 7.以單因素考察優(yōu)選最佳制備工藝，確定最佳工藝為：卵磷脂和膽固醇的比例為3:1，磷酸緩沖鹽溶液的pH為5.5，離子濃度為0.01 moL·L-1，用量30 ML姜黃素用量1mg。 8.用AH110D勻

6、質(zhì)機(jī)處理了姜黃素脂質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)姜黃素脂質(zhì)體的粒徑變小。 9.初步進(jìn)行姜黃素脂質(zhì)體的物理化學(xué)參數(shù)研究，采用透射電鏡技術(shù)觀(guān)察其外觀(guān)呈完整圓球形或橢圓形的球粒，粒徑主要分布于33.3-88.7nm左右，采用電泳技術(shù)測(cè)定其表面荷電為負(fù)電荷，pH為4.8±0.2，包封率為73.49％，最佳貯存條件是3-5℃冷藏保存，滲漉率為0.27％ 10.本文研究了姜黃素脂質(zhì)體尾靜脈注射給藥在小鼠體內(nèi)的組織分布，結(jié)果表明姜黃素脂質(zhì)體在肝、和肺等臟

7、器分布較多。 (二)結(jié)論 1.采用HPIC法測(cè)定姜黃素的含量，方法準(zhǔn)確可靠，操作方便，可行。 2.滲漉法提取姜黃素，方法簡(jiǎn)單方便，為其工業(yè)生產(chǎn)提供了一定的依據(jù)。 3.DM301樹(shù)脂純化姜黃素簡(jiǎn)單可行，但還有待進(jìn)一步提供姜黃素的轉(zhuǎn)移率。 4.薄膜法制備姜黃素脂質(zhì)體方法簡(jiǎn)便，包封率高。 5.選擇脂質(zhì)體作為姜黃素的載體是可行的，姜黃素脂質(zhì)體包封率高，藥物溶解度明顯增加，穩(wěn)定性增強(qiáng)。 6.