紫草素提取、轉(zhuǎn)化及其脂質(zhì)體制備工藝研究.pdf

1、紫草為紫草科紫草屬植物紫草的干燥根，分為新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle) Johnst和內(nèi)蒙紫草Arnebiaguttata Bung，中醫(yī)臨床主要用于血熱毒盛、濕疹、水火燙傷等癥?，F(xiàn)代藥理研究表明，紫草總色素具有抗炎、抗肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等作用，其中紫草素為主要活性成分。紫草素在紫草中含量較低，幾乎不溶于水，體內(nèi)吸收差，限制了其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用。本課題對(duì)紫草素的提取，轉(zhuǎn)化及其脂質(zhì)體制備工藝進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。

2、r>　　目的：
　　1.研究紫草總色素的最佳提取工藝。
　　2.研究紫草素堿化萃取最佳轉(zhuǎn)化工藝，以得到高純度紫草素。
　　3.研究紫草素脂質(zhì)體的制備工藝并進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。
　　方法：
　　1.單因素考察：以紫草總色素得率為指標(biāo)，分別對(duì)提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)、料液比進(jìn)行考察，確定主要因素及水平；正交試驗(yàn)：以紫草總色素得率為指標(biāo)，進(jìn)行三因素三水平的正交試驗(yàn)，采用方差分析方法對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，確定

3、紫草總色素最佳提取工藝，并進(jìn)行工藝驗(yàn)證。
　　2.單因素考察：以紫草素轉(zhuǎn)化率和純度為指標(biāo)，分別對(duì)轉(zhuǎn)化溫度、轉(zhuǎn)化時(shí)間、料液比、氫氧化鈉溶液的濃度進(jìn)行考察，確定主要因素和水平；正交試驗(yàn)：以紫草素轉(zhuǎn)化率指標(biāo)，進(jìn)行三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)，采用方差分析方法對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，確定紫草素堿化萃取轉(zhuǎn)化最佳工藝，并進(jìn)行工藝驗(yàn)證；紫草素堿化萃取轉(zhuǎn)化產(chǎn)物結(jié)構(gòu)驗(yàn)證分析：對(duì)比轉(zhuǎn)化前后的HPLC色譜圖，同時(shí)結(jié)合1H-NMR，13C-NMR以及ESI

4、-MS數(shù)據(jù)鑒定轉(zhuǎn)化產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
　　3.建立紫草素脂質(zhì)體的HPLC含量測(cè)定方法；單因素考察：以紫草素脂質(zhì)體包封率為指標(biāo)，分別對(duì)溶劑類型、水合介質(zhì)類型、水合介質(zhì)體積、水浴溫度、超聲時(shí)間、紫草素與卵磷脂的比例、卵磷脂與膽固醇的比例進(jìn)行考察，確定主要因素和水平；正交試驗(yàn)：以紫草素脂質(zhì)體包封率為指標(biāo)，進(jìn)行三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)，采用方差分析方法對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，確定紫草素脂質(zhì)體的最佳制備工藝，并進(jìn)行工藝驗(yàn)證；紫草素脂質(zhì)體質(zhì)量評(píng)價(jià)：

5、采用HPLC法測(cè)定紫草素脂質(zhì)體的包封率，采用負(fù)染法進(jìn)行透射電鏡實(shí)驗(yàn)，表征脂質(zhì)體外觀形態(tài)；馬爾文激光粒度儀對(duì)紫草素ζ電位，粒徑大小及分布進(jìn)行測(cè)定；透析法測(cè)定脂質(zhì)體的體外釋放度。
　　結(jié)果：
　　1.單因素及正交實(shí)驗(yàn)確定紫草總色素最佳提取工藝：取紫草干燥根（粉碎成直徑小于2cm細(xì)塊）40g，置500mL錐形瓶中，加入240mL95％乙醇,水浴溫度50℃浸提4h，抽濾，同樣條件重復(fù)提取1次所得濾渣，抽濾，合并濾液，減壓旋蒸回收95

6、%乙醇，即得。工藝驗(yàn)證所得紫草總色素得率平均值為2.20%。
　　2.單因素及正交實(shí)驗(yàn)確定紫草素堿化萃取轉(zhuǎn)化最佳提取工藝：精密稱取最佳提取工藝所得紫草總色素浸膏（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32%）于500mL錐形瓶中，加入適量石油醚，水浴超聲溶解，抽濾，加入2%氫氧化鈉溶液128mL于濾液中，40℃水浴加熱，反應(yīng)4h后，將堿化水解液移入分液漏斗，加純水萃取至下層不顯藍(lán)色，合并堿水萃取液，抽濾，加甲酸至pH5～6，靜置12h，石油醚萃取至無(wú)色，減壓

7、旋蒸石油醚萃取液，50℃烘干，即得。工藝驗(yàn)證所得紫草素轉(zhuǎn)化率平均值為53.86%，純度平均值為95.60%，結(jié)構(gòu)鑒定表明轉(zhuǎn)化產(chǎn)物為紫草素。
　　3.紫草素脂質(zhì)體HPLC含量測(cè)定方法學(xué)考查結(jié)果表明，測(cè)定方法符合分析的要求；經(jīng)制劑工藝及處方篩選，確定最佳工藝及處方：精密稱取卵磷脂45.0mg，膽固醇6.4mg于圓底燒瓶中，加入50mL石油醚-甲醇（3:5）的混合溶劑，攪拌溶解，再加入紫草素5.0mg，于40℃下減壓旋蒸回收有機(jī)溶劑，在

8、圓底燒瓶中形成均勻的紫紅色脂質(zhì)膜，然后加入0.9%NaCl溶液20mL，攪拌洗脫脂質(zhì)膜1h，水浴超聲5min（功率200W），0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，靜置5min，按同樣條件反復(fù)超聲與濾膜過(guò)濾一次，即得。驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，紫草素脂質(zhì)體平均包封率結(jié)果為76.90%，平均粒徑為187.73nm。脂質(zhì)體質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果為最佳工藝所制備的脂質(zhì)體為圓形至橢圓形囊泡，分散性較好，大小較為均一，其粒徑為200nm左右，ζ電位值為-38.94mV，ζ電位