紫草素提取、轉化及其脂質體制備工藝研究.pdf

1、紫草為紫草科紫草屬植物紫草的干燥根，分為新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle) Johnst和內蒙紫草Arnebiaguttata Bung，中醫(yī)臨床主要用于血熱毒盛、濕疹、水火燙傷等癥。現代藥理研究表明，紫草總色素具有抗炎、抗肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌等作用，其中紫草素為主要活性成分。紫草素在紫草中含量較低，幾乎不溶于水，體內吸收差，限制了其進一步開發(fā)利用。本課題對紫草素的提取，轉化及其脂質體制備工藝進行了系統(tǒng)的研究。

2、r>　　目的：
　　1.研究紫草總色素的最佳提取工藝。
　　2.研究紫草素堿化萃取最佳轉化工藝，以得到高純度紫草素。
　　3.研究紫草素脂質體的制備工藝并進行質量評價。
　　方法：
　　1.單因素考察：以紫草總色素得率為指標，分別對提取溫度、提取時間、提取次數、料液比進行考察，確定主要因素及水平；正交試驗：以紫草總色素得率為指標，進行三因素三水平的正交試驗，采用方差分析方法對正交試驗結果進行統(tǒng)計學處理，確定

3、紫草總色素最佳提取工藝，并進行工藝驗證。
　　2.單因素考察：以紫草素轉化率和純度為指標，分別對轉化溫度、轉化時間、料液比、氫氧化鈉溶液的濃度進行考察，確定主要因素和水平；正交試驗：以紫草素轉化率指標，進行三因素三水平正交實驗，采用方差分析方法對正交實驗結果進行統(tǒng)計學處理，確定紫草素堿化萃取轉化最佳工藝，并進行工藝驗證；紫草素堿化萃取轉化產物結構驗證分析：對比轉化前后的HPLC色譜圖，同時結合1H-NMR，13C-NMR以及ESI

4、-MS數據鑒定轉化產物結構。
　　3.建立紫草素脂質體的HPLC含量測定方法；單因素考察：以紫草素脂質體包封率為指標，分別對溶劑類型、水合介質類型、水合介質體積、水浴溫度、超聲時間、紫草素與卵磷脂的比例、卵磷脂與膽固醇的比例進行考察，確定主要因素和水平；正交試驗：以紫草素脂質體包封率為指標，進行三因素三水平正交實驗，采用方差分析方法對正交實驗結果進行統(tǒng)計學處理，確定紫草素脂質體的最佳制備工藝，并進行工藝驗證；紫草素脂質體質量評價：

5、采用HPLC法測定紫草素脂質體的包封率，采用負染法進行透射電鏡實驗，表征脂質體外觀形態(tài)；馬爾文激光粒度儀對紫草素ζ電位，粒徑大小及分布進行測定；透析法測定脂質體的體外釋放度。
　　結果：
　　1.單因素及正交實驗確定紫草總色素最佳提取工藝：取紫草干燥根（粉碎成直徑小于2cm細塊）40g，置500mL錐形瓶中，加入240mL95％乙醇,水浴溫度50℃浸提4h，抽濾，同樣條件重復提取1次所得濾渣，抽濾，合并濾液，減壓旋蒸回收95

6、%乙醇，即得。工藝驗證所得紫草總色素得率平均值為2.20%。
　　2.單因素及正交實驗確定紫草素堿化萃取轉化最佳提取工藝：精密稱取最佳提取工藝所得紫草總色素浸膏（質量分數為32%）于500mL錐形瓶中，加入適量石油醚，水浴超聲溶解，抽濾，加入2%氫氧化鈉溶液128mL于濾液中，40℃水浴加熱，反應4h后，將堿化水解液移入分液漏斗，加純水萃取至下層不顯藍色，合并堿水萃取液，抽濾，加甲酸至pH5～6，靜置12h，石油醚萃取至無色，減壓

7、旋蒸石油醚萃取液，50℃烘干，即得。工藝驗證所得紫草素轉化率平均值為53.86%，純度平均值為95.60%，結構鑒定表明轉化產物為紫草素。
　　3.紫草素脂質體HPLC含量測定方法學考查結果表明，測定方法符合分析的要求；經制劑工藝及處方篩選，確定最佳工藝及處方：精密稱取卵磷脂45.0mg，膽固醇6.4mg于圓底燒瓶中，加入50mL石油醚-甲醇（3:5）的混合溶劑，攪拌溶解，再加入紫草素5.0mg，于40℃下減壓旋蒸回收有機溶劑，在

8、圓底燒瓶中形成均勻的紫紅色脂質膜，然后加入0.9%NaCl溶液20mL，攪拌洗脫脂質膜1h，水浴超聲5min（功率200W），0.45μm微孔濾膜過濾，靜置5min，按同樣條件反復超聲與濾膜過濾一次，即得。驗證試驗結果表明，紫草素脂質體平均包封率結果為76.90%，平均粒徑為187.73nm。脂質體質量評價結果為最佳工藝所制備的脂質體為圓形至橢圓形囊泡，分散性較好，大小較為均一，其粒徑為200nm左右，ζ電位值為-38.94mV，ζ電位