siRNA的化學合成及其在醫(yī)學研究中的應用初探.pdf

1、RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是近年來發(fā)展起來一項重要的反向遺傳學技術，由于它的快速、高效，可以實現(xiàn)基因沉默的高通量，而在生命科研究領域得到廣泛的應用。在哺乳類(包括人類)RNAi研究中使用的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)是一種19-23nt的帶有3'端的雙鏈RNA(doublestrainRNA，dsRNA)，化學合成是獲得siRNA最直接、最可靠的方法。本研究首先進行siR

2、NA的化學合成的嘗試，進而利用化學合成的siRNA沉默外源、內源和病毒基因的實驗研究。研究分為三個部分： 第一部分，siRNA的化學合成與有效性檢測，利用DNPA保護的核酸單體進行siRNA的化學合成，通過與靶基因(報告基因EGFP)共轉染的方法定量檢測其基因沉默效果和細胞毒性作用。結果表明，合成的靶向EGFP的siRNA在100-300nM的轉染濃度下能夠有效沉默靶基因，同時未發(fā)現(xiàn)明顯的細胞毒性。 第二部分，靶向SMP

3、D1對卵母細胞自發(fā)性凋亡的保護作用，本研究中設計合成了六對siRNA，體外轉染3T3細胞，Westernbot和熒光定量PCR方法檢測其基因沉默效果，篩選獲得3對有效的siRNA；通過顯微注射方法將較早期合成的3對siRNA導入小鼠卵母細胞，分別于48h和72h后利用彗星分析方法檢測DAN破壞程度來推測凋亡發(fā)生的情況。結果顯示，3對siRNA中的1對能夠顯著降低卵母細胞的DAN損傷程度。 第三部分，化學合成siRNA對SARS-