斑馬魚慢性心衰模型的構(gòu)建及其肌鈣蛋白基因tnnt2a時空表達研究.pdf

1、[目的]
　　用ISO藥浴斑馬魚，構(gòu)建斑馬魚心氣虛證慢性心衰模型，并探究該模型體內(nèi)tnnt2a的時空表達。
　　[方法]
　　用不同濃度的鹽酸異丙腎上腺素(isoproterenol，ISO)持續(xù)多時間點藥浴斑馬魚，通過對死亡率和心率的統(tǒng)計分析，以確定合適的藥物濃度和用藥時間，從而構(gòu)建斑馬魚心氣虛證慢性心衰模型;運用視頻分析法間接測量斑馬魚的心功能指標，評價該模型的心功能變化情況;通過合成地高辛標記的斑馬魚心肌肌鈣蛋白

2、基因（cardiac troponin T type2a，tnnt2a）反義RNA探針，運用斑馬魚整體原位雜交技術進行tnnt2a的表達定位，雙標準曲線相對定量qPCR法探究該心衰模型tnnt2a的表達水平。
　　[結(jié)果]
　　1.ISO對斑馬魚心率的影響:ISO濃度為0.015、0.020 mg/ml的處理組斑馬魚心率在24～48 hpf區(qū)間內(nèi)的心率與對照組無統(tǒng)計差異，48 hpf之后ISO處理組心率均明顯下降，各時間點與

3、對照組比有顯著差異(P＜0.01)，57 hpf后心率開始回升。
　　2.斑馬魚心功能改變:以0.020 mg/ml ISO藥浴斑馬魚構(gòu)建心衰模型，72 hpf斑馬魚心功能指標心室表面積改變率(FAC)、心室短軸縮短率(FSs)及長軸縮短率(FSL)均下降，其中FAC、FSL有顯著差異（P＜0.01），F(xiàn)Ss有統(tǒng)計差異（P＜0.05）。
　　3.斑馬魚tnnt2a的表達定位:用地高辛標記的tnnt2a RNA探針進行整體原位

4、雜交，結(jié)果顯示tnnt2a特異表達于斑馬魚心臟，且心室表達量高于心房。
　　4.斑馬魚tnnt2a的表達水平:雙標準曲線相對定量qPCR結(jié)果顯示經(jīng)ISO藥浴后的模型組斑馬魚tnnt2a在36、48、60、72、96 hpf5個時間點的表達水平顯著增高(P＜0.01)。
　　[結(jié)論]
　　1.模型構(gòu)建方案:用濃度為0.020 mg/ml的ISO分別在24、30、36、48、54 hpf五個時間段連續(xù)藥浴斑馬魚，可構(gòu)建斑馬