異丙腎上腺素誘導(dǎo)斑馬魚(yú)胚胎慢性心衰模型的建立.pdf

1、[目的]
　　利用異丙腎上腺素(Isoproterenol，ISO)誘導(dǎo)建立斑馬魚(yú)胚胎慢性心衰模型，通過(guò)采集和測(cè)算斑馬魚(yú)胚胎的心率、心臟室腔收縮面積、心肌細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞凋亡情況等實(shí)驗(yàn)參數(shù)，建立斑馬魚(yú)心衰模型的標(biāo)準(zhǔn)，從而為心衰研究以及藥物篩選提供可靠的模型，并為臨床提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　[方法]
　　首先探索ISO藥浴誘導(dǎo)斑馬魚(yú)心衰的相對(duì)最適濃度和藥浴時(shí)間，對(duì)斑馬魚(yú)胚胎行相應(yīng)造模處理。將胚胎剝膜后選取無(wú)損傷的斑馬

2、魚(yú)胚胎并隨機(jī)分成兩組（處理組和對(duì)照組）。在胚胎受精后(hour post fertilization，hpf)24、30、36、48、54小時(shí)（即24、30、36、48、54 hpf的胚胎）進(jìn)行藥浴液更換，并隨機(jī)采集48、54、57、72 hpf各時(shí)間點(diǎn)每組斑馬魚(yú)心率和死亡情況。對(duì)72 hpf的各組斑馬魚(yú)行心臟搏動(dòng)視頻采集、原位雜交處理及免疫熒光實(shí)驗(yàn)，以估算心臟射血分?jǐn)?shù)、比較心臟形態(tài)變化、心肌細(xì)胞形態(tài)及caspase3蛋白表達(dá)情況。

3、r>　　[結(jié)果]
　　1.心率及心臟表型:
　　心率情況:①采用兩日五次加藥用濃度為0.02 mg/ml的ISO處理的斑馬魚(yú)其心率在48 hpf、54 hpf、57 hpf與對(duì)照組相比均有所下降，72 hpf采集心率為71.2±14.7，對(duì)照組為196.8±7.5。且與對(duì)照組比較處理組心率顯著低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　鏡下觀察心臟表型情況:各濃度組(0.02、0 mg/ml)72 hpf時(shí)心包水

4、腫率為:38.9％、26.7％。
　　2.心功能:利用相關(guān)軟件分析斑馬魚(yú)心臟跳動(dòng)視頻，得到收縮末期與舒張末期的面積值，其差值除以舒張末期值便是一個(gè)心動(dòng)周期的射血分?jǐn)?shù)的估計(jì)值，而經(jīng)結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)處理組射血分?jǐn)?shù)較對(duì)照組降低了32.5％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.心房、心室形態(tài)大小:原位雜交染色后光鏡下取腹部正位面觀察:①72 hpf期斑馬魚(yú)心房形態(tài)大小情況:與對(duì)照組比較:0.02mg/ml處理組心房形態(tài)大小無(wú)明顯改

5、變，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。②72 hpf期斑馬魚(yú)心室形態(tài)大小情況:與對(duì)照組比較:0.02mg/ml處理組心室形態(tài)大小明顯變大，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.心肌細(xì)胞形態(tài)大小及數(shù)目情況:
　　整體免疫熒光染色后激光共聚焦顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞形態(tài)大小情況:①處理組72 hpf時(shí)期斑馬魚(yú)胚胎其心室心肌細(xì)胞形態(tài)大小與對(duì)照組比較無(wú)明顯差別。②心房心肌細(xì)胞形態(tài)大小未予觀察。
　　激光共聚焦顯微鏡下觀察心肌細(xì)胞數(shù)

6、目變化情況:①處理組72 hpf時(shí)期斑馬魚(yú)胚胎其心室心肌細(xì)胞數(shù)目，與對(duì)照組比較:無(wú)明顯減少，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)②心房心肌細(xì)胞數(shù)目未予觀察統(tǒng)計(jì)。
　　5.整體免疫熒光檢測(cè)心肌細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)情況:①處理組72 hpf時(shí)期斑馬魚(yú)胚胎其心室心肌細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)，與對(duì)照組相比較:有顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)②心房心肌細(xì)胞Caspase-3蛋白的表達(dá)情況未予觀察統(tǒng)計(jì)。
　　[結(jié)論