MGMT基因啟動子甲基化在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生中的作用.pdf

1、目的：
　　對臨床收集并放置于零下80攝氏度低溫冰箱的不同級別的膠質(zhì)瘤標(biāo)本，取部分組織石蠟包埋并切片后進(jìn)行免疫組化檢測腫瘤標(biāo)本MGMT甲基化情況，另取部分標(biāo)本組織用組織DNA提取試劑盒提取全基因組DNA，采用巢式PCR對MGMT啟動子基因甲基化進(jìn)行擴(kuò)增，以及變性高效液相色譜（DHPLC）檢測并驗(yàn)證MGMT啟動子甲基化存在情況。
　　方法：
　　第一部分：將人腦膠質(zhì)瘤各個(gè)標(biāo)本以及瘤周正常腦組織分別取部分組織進(jìn)行免疫組化實(shí)

2、驗(yàn)，觀察腫瘤組織及瘤周正常組織的甲基化情況。
　　第二部分：將人腦膠質(zhì)瘤切取部分用于全基因組DNA提取，并采用巢式PCR對MGMT啟動子基因甲基化進(jìn)行擴(kuò)增，后進(jìn)行變性高效液相色譜（DHPLC）驗(yàn)證 MGMT啟動子甲基化情況以及采用甲基化特異性 PCR進(jìn)行膠質(zhì)瘤標(biāo)本甲基化檢測。
　　結(jié)果：
　　1、分別對不同 WHO分級的膠質(zhì)瘤進(jìn)行MGMT啟動子基因甲基化檢測，發(fā)現(xiàn)2例WHO I級膠質(zhì)瘤有0例出現(xiàn)甲基化，WHO II級膠

3、質(zhì)瘤30例，檢測出14例出現(xiàn)甲基化，甲基化比例為14/30即甲基化率為46.7％，WHO II-III級膠質(zhì)瘤11例，檢測出4例有存在甲基化，甲基化比例為4/11即甲基化率36.4%，WHO III級膠質(zhì)瘤22例，檢測出13例存在有甲基化，甲基化比例為13/22即甲基化率為59.1%，WHO IV級膠質(zhì)瘤26例，檢測出8例存在甲基化，甲基化比例為8/26,及甲基化率為30.8%。
　　2、同時(shí)對該91例膠質(zhì)瘤標(biāo)本采用高效液相色譜（

4、DHPLC）、甲基化特異性PCR檢查甲基化情況以及進(jìn)行免疫組化觀察甲基化情況，三種方法檢測的結(jié)果上存在一致性。
　　結(jié)論：
　　通過對不同級別的膠質(zhì)瘤進(jìn)行甲基化特異性PCR、免疫組化以及高效液相色譜（DHPLC）檢查啟動子MGMT甲基化情況，發(fā)現(xiàn)在較低級別的膠質(zhì)瘤中存在MGMT甲基化發(fā)生頻率較大，而在高級別的膠質(zhì)瘤中MGMT甲基化的頻率則相對要低一些，但無論是在低級別人腦膠質(zhì)瘤還是在較高級別的人腦膠質(zhì)瘤中都存在一定頻率的MG