FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化在肺癌診斷中的價值.pdf

1、背景:
　　目前，肺癌的發(fā)病率在世界范圍內處于首位，其還是成為許多國家惡性腫瘤死亡的主要原因。臨床上，通過影像學、支氣管鏡、CT引導下肺穿刺活檢等技術來確診肺癌，但在已診斷明確肺癌中75％都是晚期或者轉移。在西方國家，肺癌的5年生存率不到15％，在發(fā)展中國家如亞太地區(qū)、印度，5年生存率甚至不到9％。隨著影像學、支氣管鏡和痰脫落細胞的技術成熟和先進，但肺癌患者的死亡率未能得到很大的降低和改善。需要更多的科研及臨床工作者盡可能探尋早期

2、篩檢肺癌的靈敏和特異方法，積極探索肺癌早期的預警信號。近年來，篩選和挖掘肺癌的生物標志物已經成為熱點研究領域?；虻墓δ馨l(fā)生可遺傳、可逆性的改變，而基因的序列并未同時改變，此為表觀遺傳學。其表現形式主要是DNA甲基化，是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中較常見的早期事件，可作為早期診斷肺癌的新型標記。抑制基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化水平升高使其轉錄失活，使腫瘤發(fā)生。肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、肝癌、前列腺癌等惡性腫瘤都與啟動子CpG位點甲基化有關。

3、脆性組氨酸三聯體基因(fragile histidinetr iadgene，FHIT)、O6-甲基鳥嘌呤-DNA-甲基轉移酶(O6-Methyl guanine-DNA methyl transferase，MGMT)和Ras相關區(qū)域家族1A(Rasassociationdomain familymember-1，RASSF1A)基因啟動子CpG島甲基化已成為研究發(fā)生肺癌機制的主要方面，其有可能成為預測早期肺癌的重要生物標志。

4、　　目的:
　　探討外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化與肺癌發(fā)生發(fā)展的關系。
　　對象和方法
　　1.收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院和胸科醫(yī)院2012年10月至2013年3月期間收治的原發(fā)性肺癌患者137例，所有病例均已經病理學或細胞學確診，且未經過手術和化療的血液標本。還有收集138例肺良性患者標本，141例已排除全身各器官惡性腫瘤的同期健康體檢人群。血標本的采集和流行病學資料的搜集均由醫(yī)生在征得受試

5、者知情同意后實施。
　　2.檢測基因的甲基化水平:對研究基因(FHIT、MGMT和RASSF1A)啟動子序列的甲基化水平，采取實時熒光定量甲基化特異性PCR的方法來進行檢測。
　　3.數據分析、處理:采用SPSS12.0，采用中位數(M)和四分位間距(P25、P75)對不符合正態(tài)分布的連續(xù)性變量進行描述。采用x2檢驗對定性資料進行數據分析，對于定量資料，若為偏態(tài)分布，則采用Mann-WhitneyU檢驗對兩獨立樣本之間的比較

6、進行數據分析，采用KruskalWallis檢驗對多組獨立樣本之間的比較進行數據分析。分析肺癌與性別、年齡、吸煙、甲基化水平的危險相關性，采用多因素非條件logistic回歸分析方法。分析FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平對肺癌診斷的價值，可采用受試者操作特性(receiveroperatingcharacteristics，ROC)曲線來進行，并以曲線下面積為判斷基準，a=0.05為檢驗水準（雙側）。
　　結果:<

7、br>　　1.肺癌組FHIT、MGMT和RASSF1A基因的甲基化水平均高于肺良性組和正常對照組，差異都具有統(tǒng)計學意義(P=0.000，P=0.000，P=0.001);采用偏態(tài)分布的定量資料Mann-WhitneyU檢驗或KruskalWallis檢驗分析年齡、性別、吸煙、病理組織類型、淋巴結轉移和臨床分期與FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化率的關聯，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　2.按FHIT、MGM

8、T和RASSF1A基因啟動子甲基化水平的百分位數25％、50％、75％的分界點分別把肺癌組和對照組，肺癌組和肺良性各分為4層，采用非條件logistic回歸分析，結果顯示FHIT、MGMT和RASSF1A基因甲基化水平的增加，患肺癌的危險性增加。在肺癌組和正常組的多因素logistic回歸分析模型中，FHIT、MGMT、RASSF1A隨著其甲基化水平升高，患肺癌的危險性明顯增加(P=0.000，P=0.000，P=0.024)，高年齡和

9、吸煙可增加患肺癌的危險性(P=0.003，P=0.014);在肺癌組和肺良性組的多因素logistic回歸分析模型中，隨著FHIT、MGMT甲基化水平升高，患肺癌的危險性增加(P=0.040，P=0.005)，而RASSF1A隨其甲基化水平，患肺癌的危險性可能性很大(P=0.112)。
　　3.檢測單一指標及聯合檢測多個指標對肺癌的診斷價值的比較。結果顯示聯合3個指標的甲基化水平比單個指標檢測對肺癌診斷價值高，單個指標檢測中，對肺

10、癌診斷價值大小依次為MGMT(AUC=0.781)、FHIT(AUC=0.776)、RASSF1A(AUC=0.729);ROC曲線評價檢測單一及多個指標聯合檢測對Ⅰ+Ⅱ期肺癌的診斷價值的比較。結果顯示聯合3個指標的甲基化水平比單個指標檢測對Ⅰ+Ⅱ期肺癌診斷價值高，單個指標檢測中，對早期肺癌診斷價值大小為FHIT(AUC=0.797)、MGMT(AUC=0.783)、RASSF1A(AUC=0.725)。
　　結論:
　　1

11、.外周血FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化和肺癌有關;不同年齡、性別和吸煙史的患者FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平無明顯差別，不同的病理類型、有無淋巴結轉移以及不同的臨床分期，相應基因的甲基化水平亦無差別。
　　2.隨著FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平增加，患肺癌的危險增加。
　　3.聯合檢測FHIT、MGMT和RASSF1A基因啟動子甲基化水平對肺癌的診斷價值高，