槐角異黃酮的提取、純化分離、水解及清除自由基能力的研究.pdf

1、槐角是一種傳統(tǒng)中藥，具有清熱涼血等作用?；苯侵懈缓慄S酮類化合物，其中槐角苷的含量最高，且藥用活性很強(qiáng)，能有效防治癌癥、骨質(zhì)疏松癥、婦女絕經(jīng)癥等病癥，已被《中華人民共和國藥典》(2005)確定為槐角質(zhì)量監(jiān)控和藥品標(biāo)準(zhǔn)制定的重要考量依據(jù)，在天然產(chǎn)物領(lǐng)域一直受到較大的關(guān)注?；苯强偖慄S酮經(jīng)過水解可生成染料木黃酮。染料木黃酮同樣是一種高活性異黃酮類物質(zhì)，它具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗癌、抗心血管疾病等多種作用。因此研究槐角異黃酮的提取、純化分離、

2、水解，生產(chǎn)制備槐角苷和染料木黃酮，對于相關(guān)醫(yī)藥的開發(fā)應(yīng)用具有重要意義。
　　 本研究采用加壓溶劑法提取槐角總異黃酮的工藝方法，利用正交試驗(yàn)優(yōu)化出其工藝參數(shù)為：提取時(shí)間5 min、提取溫度110℃、提取壓力1300 kPa、液固比12.5 mL/g、乙醇體積分?jǐn)?shù)50％。在此條件下槐角總異黃酮得率最大，為28.4％。加壓溶劑法與微波輔助法、超聲提取法和亞臨界水法相比，更加短時(shí)高效；反應(yīng)過程中充入高純氮?dú)膺M(jìn)行保護(hù)，有效防止反應(yīng)產(chǎn)物發(fā)生

3、氧化；同時(shí)其以水和醇為提取溶劑，符合中藥現(xiàn)代化發(fā)展的綠色、節(jié)能、環(huán)保的理念，是一種理想的提取中藥材有效成分的方法。研究了溶劑萃取法對槐角異黃酮粗提液的初步純化效果。在相比(水：有機(jī)溶劑)為1:2的條件下，依次利用乙醚(1次)、乙酸乙酯(1次)、正丁醇(3次)進(jìn)行萃取，終產(chǎn)物萃取率為94.1％，純度為52.4％。經(jīng)過初步純化，不僅產(chǎn)物純度相比粗提物純度(19.5％)有大幅提高，且一定程度上富集了糖苷型異黃酮。利用高速逆流色譜對槐角總異黃酮

4、進(jìn)行分離，得到了高純度槐角苷。通過試驗(yàn)，確定了溶劑體系為：正己烷-正丁醇-甲醇-水(2:3.8:1.2:4)及HSCCC分離操作參數(shù)：主機(jī)轉(zhuǎn)速為900r/min，流動相流速2mL/min，分離溫度25℃，樣品濃度10 mg/mL。在此條件下對槐角總異黃酮進(jìn)行分離，整個過程僅耗時(shí)5個小時(shí)，分離得到了高純度的槐角苷，分離度高，峰形良好。證明高速逆流色譜法是一種極為有效的天然植物異黃酮分離方法。利用鹽酸甲醇溶液對槐角總異黃酮進(jìn)行水解，生產(chǎn)染料

5、木黃酮。以水解率為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)曲面法中的Box-Behnken設(shè)計(jì)對水解工藝進(jìn)行了優(yōu)化，建立了槐角異黃酮的水解率與3個影響因素的二次多項(xiàng)式回歸模型。該模型高度顯著，擬合度良好。借助Design Expert V8.0.6軟件對模型方程進(jìn)行分析，得出優(yōu)化的酸水解條件為：水解時(shí)間3.8 h、鹽酸濃度2.59 mol/mL、水解溫度78.5℃。在此條件下得到槐角總異黃酮的水解率為93.38％。證明鹽酸法是一種較為有效的

6、槐角異黃酮水解方法。
　　 本研究利用“Amano”β-糖苷酶對槐角總異黃酮進(jìn)行水解，生產(chǎn)染料木黃酮。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，利用響應(yīng)曲面法中的Box-Behnken設(shè)計(jì)對水解工藝進(jìn)行了優(yōu)化，建立了槐角異黃酮的水解率與四個影響因素的二次多項(xiàng)式回歸模型。該模型高度顯著，擬合度良好。借助DesignExpert V8.0.6軟件對模型方程進(jìn)行分析，得出優(yōu)化的酶水解條件為：酶濃度0.5 mg/mL、水解時(shí)間3.68 h、pH4.95、水

7、解溫度59.2℃。在此條件下得到槐角總異黃酮的水解率為95.76％，證明“Amano”β-糖苷酶是一種十分有效的槐角異黃酮水解酶。與酸水解相比，“Amano”β-糖苷酶水解槐角異黃酮不僅水解效果良好，而且副產(chǎn)物少，產(chǎn)物純度高，綠色環(huán)保，更加值得工業(yè)推廣。利用α-脫氧核醣法和鄰苯三酚自氧化法測定了染料木黃酮、染料木苷及槐角苷清除羥自由基和超氧自由基的能力。試驗(yàn)證明三種異黃酮均具有一定的清除活性，清除能力的大小與不同異黃酮的結(jié)構(gòu)、處理濃度以