野葛異黃酮的分離純化、抗氧化性及光質(zhì)對(duì)異黃酮生物合成的影響.pdf

1、野葛[Pueraria lobata（Willd） Ohwi.]分類學(xué)上屬于豆科植物，是原產(chǎn)于我國(guó)的一種重要的野生植物資源，其主要生物活性成分為葛根素、大豆甙和大豆甙元等異黃酮（isoflavonoids）化合物。近年來(lái)，大量的臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)葛根（野葛的塊根）異黃酮具有廣泛的藥理功能，并且這類主要存在于豆科植物中的異黃酮還具有多種多樣的生物學(xué)功能，同時(shí)，異黃酮類化合物具有防護(hù)紫外線的作用并可作為活性氧的清除劑。但文獻(xiàn)中對(duì)于野葛異黃酮相關(guān)單

2、體成分的抗氧化性研究較少，因此，有必要對(duì)于異黃酮相關(guān)單體成分進(jìn)行分離純化和抗氧化活性的研究。
　　 近年來(lái)，通過(guò)植物離體培養(yǎng)技術(shù)成功培養(yǎng)了野葛懸浮細(xì)胞和野葛愈傷組織，并通過(guò)控制碳源、氮源、pH值和添加誘導(dǎo)子等調(diào)控手段對(duì)野葛懸浮細(xì)胞和野葛愈傷組織的培養(yǎng)條件進(jìn)行了初步的優(yōu)化，為異黃酮類藥物的生產(chǎn)提供了重要的技術(shù)手段和良好試材，緩解了市場(chǎng)對(duì)異黃酮的供求矛盾。而光質(zhì)作為調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)的重要因素，對(duì)植物離體培養(yǎng)的懸浮細(xì)胞和愈傷組織同樣具有重

3、要的調(diào)控意義，通過(guò)有效光質(zhì)的適當(dāng)調(diào)控能夠使其長(zhǎng)期保持生命力和穩(wěn)定高產(chǎn)的異黃酮合成能力。因此，研究不同光質(zhì)的調(diào)控對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)量和異黃酮生物合成的影響，對(duì)進(jìn)一步利用現(xiàn)代生物技術(shù)方法進(jìn)行異黃酮化合物的生產(chǎn)也有著實(shí)際的意義。
　　 另外，離體培養(yǎng)的野葛懸浮細(xì)胞及愈傷組織中與野生葛根的異黃酮成分及含量有著較大的差異，而且文獻(xiàn)對(duì)于野葛懸浮細(xì)胞及愈傷組織異黃酮成分的研究較少，因本研究摸索的野葛根異黃酮組分提取、分離純化、鑒定和抗氧化性檢測(cè)的方法

4、對(duì)于研究離體培養(yǎng)的野葛懸浮細(xì)胞及愈傷組織的異黃酮成分及抗氧化活性具有十分重要的借鑒的價(jià)值。
　　 因此，本文對(duì)安徽舒城野葛根樣進(jìn)行分離純化，研究其異黃酮成分，并對(duì)提取的野葛異黃酮粗提物及分離純化得到的異黃酮單體化合物的抗氧化活性進(jìn)行研究；以及通過(guò)不同光質(zhì)處理野葛懸浮培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，研究不同光質(zhì)對(duì)野葛離體培養(yǎng)體系中細(xì)胞生長(zhǎng)量及異黃酮化合物的生物合成含量的影響情況，取得以下結(jié)論：
　　 從安徽舒城野葛根樣中提取并分離純化出11

5、個(gè)單體化合物，對(duì)其中得率較高的7個(gè)化合物作了HPLC檢測(cè)和NMR、ESI-MS鑒定結(jié)構(gòu)，目前鑒定出4個(gè)化合物：化合物1為大豆苷元，化合物7為大豆苷，化合物8為芒柄花苷，化合物10為染料木苷。
　　 以野葛異黃酮粗提物和葛根素、大豆苷元、大豆苷、芒柄花苷和染料木苷5個(gè)異黃酮單體化合物為供試樣品，Vc和茶多酚為對(duì)照，研究其對(duì)DPPH·自由基清除能力，得出①在0.01～0.5mg/mL濃度范圍內(nèi)，野葛異黃酮粗提物和葛根素對(duì)DPPH·的

6、自由基清除率與濃度均成正相關(guān)關(guān)系，野葛異黃酮粗提物的效果與茶多酚和Vc對(duì)照品的效果相當(dāng)，但野葛異黃酮粗提物的效果明顯優(yōu)于葛根素單體。②在2～10 mmol/L濃度范圍內(nèi)，葛根素、大豆苷元、大豆苷、芒柄花苷和染料木苷這5個(gè)異黃酮單體化合物對(duì)DPPH·的自由基清除率與濃度均成正相關(guān)關(guān)系，清除的效率為大豆苷元>大豆苷>染料木苷>葛根素>芒柄花苷。
　　 以野葛異黃酮粗提物和葛根素、大豆苷元、大豆苷、芒柄花苷和染料木苷5個(gè)異黃酮單體化合

7、物為供試樣品，Vc和茶多酚為對(duì)照，研究其對(duì)鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子自由基清除能力，得出①在0.2～1 mg/mL濃度范圍內(nèi)，野葛異黃酮粗提物對(duì)超氧陰離子自由基的抑制率與濃度均成正相關(guān)關(guān)系，野葛異黃酮粗提物的效果稍差于Vc，但優(yōu)于茶多酚，而且野葛異黃酮粗提物的效果明顯優(yōu)于葛根素和大豆苷元兩個(gè)異黃酮單體。葛根素和大豆苷元的濃度大于等于1 mg/mL時(shí)，才表現(xiàn)出抑制超氧陰離子的效果。②實(shí)驗(yàn)表明低濃度時(shí)異黃酮單體樣品的清除能力很小，4mm

8、ol/L的大豆苷元可達(dá)到46.58％的抑制率，因此選擇4 mmol/L作為對(duì)比實(shí)驗(yàn)的樣品濃度。5種異黃酮單體對(duì)超氧陰離子清除的效率為大豆苷元>葛根素>大豆苷>染料木苷>芒柄花苷。
　　 選取紅、黃、藍(lán)、綠、白5種不同顏色的色膜和黑暗對(duì)照處理野葛懸浮培養(yǎng)細(xì)胞系，處理的光強(qiáng)一致，得出①黃膜、白膜、紅膜處理野葛懸浮細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用（高于黑暗對(duì)照），促進(jìn)效果黃膜>白膜>紅膜，但黃膜與白膜間差別不大，白膜與紅膜間差別不大，而綠膜