逍遙散及其功能藥隊(duì)抗抑郁效應(yīng)和分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：對(duì)比性研究逍遙散及其功能藥隊(duì)的抗抑郁藥效和作用機(jī)制，為揭示逍遙散功效配伍與抗抑郁效應(yīng)的相關(guān)性，闡釋逍遙散“疏肝解郁”功效的科學(xué)內(nèi)涵提供實(shí)驗(yàn)研究依據(jù)。
　　方法：本研究從整體行為學(xué)、分子水平、數(shù)據(jù)系統(tǒng)性分析三個(gè)層面探討和比較逍遙散及其功能藥隊(duì)（包括疏肝藥：柴胡-薄荷；養(yǎng)血藥：白芍-當(dāng)歸；健脾藥：白術(shù)-茯苓-生姜-甘草）抗抑郁效應(yīng)和作用機(jī)制。①采用應(yīng)激抑郁小鼠模型（TST、FST），觀(guān)察逍遙散及其功能藥隊(duì)對(duì)小鼠不動(dòng)時(shí)間、自主活動(dòng)

2、量的影響。②采用CUMS大鼠模型，觀(guān)察逍遙散及其功能藥隊(duì)對(duì)模型大鼠自主活動(dòng)量（爬行距離和站立次數(shù)）、體重增長(zhǎng)度、糖水偏愛(ài)百分比、T形迷宮覓食潛伏期的影響。③采用CUMS大鼠模型，觀(guān)察逍遙散及其顯效功能藥隊(duì)對(duì)模型大鼠自主活動(dòng)量（爬行距離和站立次數(shù)）、體重增長(zhǎng)度、糖水偏愛(ài)百分比、Morris水迷宮測(cè)試指標(biāo)（逃避潛伏期、目標(biāo)象限滯留時(shí)間百分比、目標(biāo)象限運(yùn)動(dòng)距離百分比、目標(biāo)象限進(jìn)入次數(shù)百分比、逃逸平臺(tái)進(jìn)入次數(shù)、有效區(qū)域進(jìn)入次數(shù)）的影響。④采用E

3、LISA法測(cè)定CUMS模型大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ含量，血清 CRH、Cort含量，血清、大腦皮質(zhì)及海馬中5-HT、BDNF含量，觀(guān)察逍遙散及其顯效功能藥隊(duì)對(duì)上述指標(biāo)的影響。⑤采用ELISA法測(cè)定 CUMS模型大鼠大腦皮質(zhì)、海馬部位IDOase、Cort含量；rt-qPCR法測(cè)定大腦皮質(zhì)、海馬部位GCR-mRNA、TrkB-mRNA相對(duì)表達(dá)量；Western Blot（WB）法測(cè)定大腦皮質(zhì)、海馬部位 IL-1

4、β相對(duì)含量，觀(guān)察逍遙散及其顯效功能藥隊(duì)對(duì)上述指標(biāo)的影響。⑥應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)行為學(xué)、分子機(jī)制指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類(lèi)分析和作用強(qiáng)度分析。
　　結(jié)果：
　?。?）逍遙散及其功能藥隊(duì)對(duì)應(yīng)激抑郁模型小鼠行為學(xué)的影響
　　逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、逍遙散去養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥均能明顯縮短 TST、FST試驗(yàn)中小鼠的不動(dòng)時(shí)間（P＜0.01），且五組藥物作用無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。健脾藥對(duì)小鼠不動(dòng)時(shí)間無(wú)顯著影響（P＞0

5、.05）。所有藥物組在所試劑量下對(duì)小鼠自主活動(dòng)無(wú)明顯影響（P＞0.05）。
　?。?）逍遙散及其功能藥隊(duì)對(duì)CUMS模型大鼠行為學(xué)的影響
　　連續(xù)給藥4周（即造模6周）時(shí)，逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥均能顯著增加模型大鼠爬行格數(shù)、站立次數(shù)、體重增長(zhǎng)度、糖水偏愛(ài)百分比（P＜0.05或 P＜0.01），并顯著減少240s內(nèi)覓食潛伏期（P＜0.01或P＜0.05）。健脾藥組未出現(xiàn)相同的效應(yīng)（P＞0.05）。其中，逍遙散和疏肝藥對(duì)模型大鼠上

6、述行為學(xué)指標(biāo)的改善作用優(yōu)于養(yǎng)血藥（P＜0.05或 P＜0.01），逍遙散與疏肝藥比較，作用無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　（3）逍遙散及其顯效功能藥隊(duì)對(duì)CUMS模型大鼠行為學(xué)的影響
　　連續(xù)給藥4周，逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、逍遙散去養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥均能顯著增加模型動(dòng)物爬行格數(shù)、站立次數(shù)、糖水偏愛(ài)百分比、目標(biāo)象限滯留時(shí)間百分比、目標(biāo)象限運(yùn)動(dòng)距離百分比、目標(biāo)象限進(jìn)入次數(shù)百分比、逃逸平臺(tái)進(jìn)入次數(shù)和有效區(qū)域進(jìn)入次數(shù)（P＜0

7、.01），并能顯著縮短逃避潛伏期（P＜0.01）。逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥尚能顯著提高模型動(dòng)物體重增長(zhǎng)度（P＜0.01）。對(duì)上述行為學(xué)指標(biāo)的影響，疏肝藥、逍遙散、逍遙散去養(yǎng)血藥優(yōu)于養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥（P＜0.01），但疏肝藥、逍遙散、逍遙散去養(yǎng)血藥三者之間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　?。?）逍遙散及其顯效功能藥隊(duì)對(duì)CUMS模型大鼠細(xì)胞因子-內(nèi)分泌（HPA軸）-5-HT/BDNF路徑相關(guān)分子指標(biāo)的影響
　　逍遙

8、散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、逍遙散去養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥均能顯著對(duì)抗CUMS程序所致血清IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平的升高（P＜0.01）；逍遙散、疏肝藥亦能顯著降低模型大鼠大腦皮質(zhì)和海馬部位 IL-1β含量（P＜0.05）。其中，逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥對(duì)血清細(xì)胞因子水平的下調(diào)作用強(qiáng)于養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥（P＜0.05或 P＜0.01），且三組藥物效應(yīng)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　逍遙散、養(yǎng)血藥、逍遙

9、散去疏肝藥能顯著對(duì)抗CUMS程序所致血清CRH、Cort的升高（P＜0.01或P＜0.05）；逍遙散、養(yǎng)血藥亦能顯著對(duì)抗CUMS程序所致大腦皮質(zhì)和海馬 Cort升高（P＜0.05），并上調(diào)模型大鼠大腦皮質(zhì)和海馬GCR-mRNA表達(dá)（P＜0.05）。其中，逍遙散、養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥三者效應(yīng)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥未表現(xiàn)出調(diào)節(jié)上述指標(biāo)的作用（P＞0.05）。
　　逍遙散、疏肝藥、養(yǎng)血藥、逍遙散去養(yǎng)血藥、

10、逍遙散去疏肝藥能顯著提高模型大鼠大腦皮質(zhì)和海馬部位5-HT含量（P＜0.01或P＜0.05）。其中，逍遙散對(duì)海馬5-HT的改善作用最顯著，優(yōu)于疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥（P＜0.01或P＜0.05）。逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥三者對(duì)上述指標(biāo)的作用強(qiáng)于養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥（P＜0.05或 P＜0.01）。逍遙散、養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥能顯著提高模型大鼠血清5-HT水平（P＜0.01），逍遙散、疏肝藥亦能顯著降低模型大腦皮質(zhì)和海馬IDOa

11、se活性（P＜0.05）。
　　逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥能顯著對(duì)抗CUMS程序所致血清、大腦皮質(zhì)、海馬 BDNF的下降（P＜0.01或 P＜0.05），三者效應(yīng)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥對(duì)模型大鼠血清、大腦皮質(zhì)、海馬BDNF均無(wú)顯著改善作用（P＞0.05）。逍遙散、疏肝藥亦能顯著提高模型大鼠大腦皮質(zhì)和海馬TrkB-mRNA表達(dá)（P＜0.01或P＜0.05）。
　?。?）行為學(xué)、分子機(jī)制指標(biāo)數(shù)據(jù)

12、的聚類(lèi)分析、作用強(qiáng)度分析
　　以行為學(xué)指標(biāo)或以抗抑郁分子機(jī)制指標(biāo)為變量，通過(guò)聚類(lèi)分析發(fā)現(xiàn)逍遙散組、疏肝藥組、逍遙散去養(yǎng)血藥組為一類(lèi)；養(yǎng)血藥組、逍遙散去疏肝藥組為一類(lèi)。并且在逍遙散組、疏肝藥組、逍遙散去養(yǎng)血藥組三者中，疏肝藥組、逍遙散去養(yǎng)血藥組歸為一類(lèi)，逍遙散組為一類(lèi)。提示對(duì)行為學(xué)指標(biāo)或抗抑郁分子機(jī)制指標(biāo)的調(diào)節(jié)方面，逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥具有相同屬性，逍遙散的作用與后兩者則又有一定區(qū)別；養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥具有相同屬性。<

13、br>　　通過(guò)不同顯效功能藥隊(duì)相同指標(biāo)之間的作用強(qiáng)度比較可知，逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥對(duì)行為學(xué)指標(biāo)和分子機(jī)制指標(biāo)的改善作用明顯優(yōu)于養(yǎng)血藥、逍遙散去疏肝藥。在行為學(xué)指標(biāo)、血清細(xì)胞因子和大腦皮質(zhì)5-HT水平上，逍遙散、疏肝藥、逍遙散去養(yǎng)血藥三者干預(yù)作用基本相似，但逍遙散提高海馬5-HT水平的作用強(qiáng)于疏肝藥和逍遙散去養(yǎng)血藥。養(yǎng)血藥與逍遙散去疏肝藥對(duì)上述指標(biāo)的作用強(qiáng)度基本相同。
　　通過(guò)同一顯效功能藥隊(duì)不同指標(biāo)之間的作用強(qiáng)度比較可知

14、，基于行為學(xué)研究，含有柴胡-薄荷的藥物組合作用強(qiáng)度表現(xiàn)為：自主活動(dòng)能力＞記憶、認(rèn)知能力＞情緒情感調(diào)節(jié)；含有白芍-當(dāng)歸的藥物組合作用強(qiáng)度表現(xiàn)為：記憶、自主活動(dòng)能力＞情緒情感調(diào)節(jié)＞認(rèn)知能力。基于分子機(jī)制研究，含有柴胡-薄荷的藥物組合表現(xiàn)為：中樞5-HT水平＞細(xì)胞因子水平；含有白芍-當(dāng)歸的藥物組合則表現(xiàn)相反。
　　通過(guò)指標(biāo)效應(yīng)趨勢(shì)總結(jié)可知，代表疏肝治法的藥物組合作用側(cè)重點(diǎn)在細(xì)胞因子和中樞5-HT/BDNF/TrkB通路調(diào)節(jié)上，代表養(yǎng)血治

15、法的藥物組合側(cè)重點(diǎn)在HPA軸功能（CRH、Cort/GCR）調(diào)控上。
　　結(jié)論：逍遙散、疏肝藥隊(duì)、養(yǎng)血藥隊(duì)具有顯著抗抑郁作用，作用機(jī)制與細(xì)胞因子/HPA/5-HT-BDNF三方面功能的協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)有關(guān)，健脾藥隊(duì)的抗抑郁作用不明顯。疏肝藥隊(duì)是參與逍遙散抗抑郁作用發(fā)揮的主要功能組合，在影響自主活動(dòng)、體重及調(diào)節(jié)中樞5-HT/BDNF/TrkB通路和細(xì)胞因子方面表現(xiàn)出一定優(yōu)勢(shì)；養(yǎng)血藥隊(duì)則是輔助功能組合，在影響記憶能力、自主活動(dòng)及調(diào)節(jié) HPA軸