奶牛乳腺炎金黃色葡萄球菌凝聚因子A A區(qū)基因的克隆表達(dá).pdf

1、乳腺炎是奶牛的一種常見病和多發(fā)病，其發(fā)生的主要原因是病原微生物感染。引起乳腺炎的病原微生物多達(dá)80多種，主要包括細(xì)菌、霉形體、真菌及病毒。細(xì)菌性病原微生物中，金黃色葡萄球菌占主要地位，但多年來對金黃色葡萄球菌性乳腺炎的防治一直沒有有效的措施，本文擬對金黃色葡萄球菌凝聚因子AA區(qū)基因進(jìn)行克隆表達(dá)，為研制預(yù)防金黃色葡萄球菌性乳腺炎生物工程疫苗提供基礎(chǔ)。 本試驗(yàn)根據(jù)GeneBank公開發(fā)表的NewMan株ClfAA區(qū)序列設(shè)計(jì)引物，利用

2、PCR方法對呼和浩特周邊地區(qū)存在的4個(gè)主要的金黃色葡萄球菌基因型進(jìn)行擴(kuò)增，獲得了金黃色葡萄球菌的凝聚因子A(ClfA)A區(qū)基因。實(shí)驗(yàn)對四株不同基因型的金黃色葡萄球菌的凝聚因子A(ClfA)A區(qū)基因進(jìn)行克隆測序，與Genbank登陸的標(biāo)準(zhǔn)NewMan株C1fAA區(qū)序列進(jìn)行比對，基因3型、基因9型、基因11型與NewMan株同源性較高，分別為97.8％、96.5％、98.3％，基因5型與Newman株同源性僅為85.4％。同時(shí)基因3型、基因

3、9型、基因11型之間同源性也較高，而基因5型與另外三個(gè)基因型同源性也較低。 將測定的序列用DNAstar軟件進(jìn)行抗原表位分析，基因3型、基因9型比NewMan株多一個(gè)抗原位點(diǎn)，因此選擇了其中一個(gè)基因型即基因9型進(jìn)行表達(dá)。將該片段定向插入到原核表達(dá)載體pET-32a(+)中，獲得了重組表達(dá)質(zhì)粒pET-ClfA-Aregion。將其轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，表達(dá)了ClfA-A區(qū)蛋白。經(jīng)定位分析，目的蛋白以可溶形式