干擾β-catenin信號通路對人胃癌細胞株miRNA表達譜的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
　　本研究擬通過構(gòu)建慢病毒載體介導(dǎo)干擾人胃癌AGS、MGC-803細胞系中β-catenin信號通路的活性,利用miRNA芯片技術(shù)尋找干擾后差異表達的miRNA表達譜,為進一步了解β-catenin信號通路及相關(guān)miRNA調(diào)控胃癌的機制打下基礎(chǔ)。
　　方法:
　　構(gòu)建干擾β-catenin基因( ctnnb1)的慢病毒,分別感染人胃癌AGS和MGC-803細胞系。實時熒光定量PCR和Western Blot檢測

2、干擾效率。
　　將AGS細胞分兩組:1)實驗組:AGS干擾組,2)對照組:AGS細胞組;將MGC-803細胞分為兩組:1)實驗組:MGC-803干擾組,2)對照組:MGC-803細胞組。利用miRNA芯片篩選兩種細胞干擾β-catenin后差異表達的miRNA,并通過qPCR技術(shù)驗證部分芯片結(jié)果。
　　結(jié)果:
　　1、成功構(gòu)建干擾β-catenin基因的慢病毒 LV3-CTNNB1-homo-433與LV3-CTNNB

3、1-homo-769。LV3-CTNNB1-homo-433對AGS細胞及MGC-803細胞均具有干擾作用, LV3-CTNNB1-homo-769對 AGS細胞無干擾作用,對MGC-803細胞有干擾作用。
　　2、感染LV3-CTNNB1-homo-433后,AGS細胞、MGC-803細胞中miRNA表達譜產(chǎn)生明顯變化。其中,AGS干擾組較AGS細胞組有40個miRNA上調(diào),32個miRNA下調(diào);MGC-803干擾組較MGC-8

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