蜂蠟素降低血漿膽固醇作用機制研究（二）.pdf

1、目的：探討蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇對HepG2細胞HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平及mRNA表達的影響，揭示蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇降低血漿膽固醇作用的分子機制；比較蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇對HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平和mRNA表達的影響，明確蜂蠟素降低血漿膽固醇的主要有效成分，為蜂蠟素原料提取工藝改革和組分優(yōu)化提供依據(jù)。 方法：1.應(yīng)用MTT法檢測蜂蠟素的主要成分三十烷醇和二十八烷醇

2、對HepG2細胞存活能力的影響，確定三十烷醇和二十八烷醇不影響HepG2細胞存活能力，可用于二藥降低血漿膽固醇作用機制研究的劑量。 2.應(yīng)用WesternBlot檢測HepG2細胞HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平，圖像分析系統(tǒng)檢測HepG2細胞HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)的積分光密度，通過積分光密度值判斷不同濃度蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇對HepG2細胞HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平的影響。 3.應(yīng)用RT-PCR

3、技術(shù)檢測HepG2細胞HMG-CoA還原酶mRNA的表達，圖像分析系統(tǒng)檢測HMG-CoA還原酶mRNA的積分光密度，通過積分光密度值判斷不同濃度蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇對HepG2細胞HMG-CoA還原酶mRNA表達的影響。 資料統(tǒng)計應(yīng)用PEMS3.1統(tǒng)計分析軟件。數(shù)據(jù)以樣本均數(shù)士標準差表示。統(tǒng)計學(xué)差異采用t檢驗分析,P＜0.05表示兩組差別有顯著意義；P＜0.01表示兩組差別有非常顯著意義。 結(jié)果：1.在

4、細胞存活能力實驗中，當三十烷醇和二十八烷醇濃度為125μg·ml-1或以下時，對細胞存活能力無影響，為試驗研究可選擇的劑量范圍。 2.WesternBlot實驗結(jié)果顯示，隨著蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇(三藥的劑量均為：8×10-1、8×100、8×101μg·ml-1)濃度升高，HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平逐漸降低，有明顯的劑量依賴關(guān)系。三藥抑制HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)的IC50值雖然不同，但三藥95％可信限的范

5、圍相互之間有重疊，因此，可以認為三藥作用強度基本相同。 3.RT-PCR實驗結(jié)果顯示，隨著蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇濃度的升高，HMG-CoA還原酶mRNA的表達逐漸降低，有明顯的劑量依賴關(guān)系。三藥抑制HMG-CoA還原酶mRNA表達的IC50值雖然不同，但三藥95％可信限的范圍相互之間有重疊，因此，可以認為三藥作用強度基本相同。 4.WesternBlot和RT-PCR兩實驗結(jié)果相似，顯示蜂蠟素及其主要成分

6、三十烷醇和二十八烷醇抑制HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平和mRNA的作用強度具有同步性。 結(jié)論：1.蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇可抑制HepG2細胞HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)水平，即抑制HMG-CoA還原酶活性。 2.蜂蠟素及其主要成分三十烷醇和二十八烷醇可抑制HepG2細胞HMG-CoA還原酶mRNA表達，提示其從mRNA轉(zhuǎn)錄水平影響HMG-CoA還原酶蛋白質(zhì)合成，而降低該酶的活性。 3.三十烷醇和二十