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文檔簡介
1、【目的】
研究宮頸癌和胃癌中septin9啟動(dòng)子甲基化率,并觀察分析SAMe對(duì)宮頸癌和胃癌中septin9表達(dá)的影響,進(jìn)而探討septin9啟動(dòng)子甲基化在宮頸癌和胃癌中的意義以及SAMe誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制。
【方法】
首先,采用甲基化特異性高分辨率熔解曲線分析(methylation sensitive high resolution melting curve analysis, MS-HRM)技
2、術(shù)檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞系HeLa、胃癌細(xì)胞系MGC以及13例宮頸癌腫瘤組織中septin9啟動(dòng)子甲基化情況;并分析septin9啟動(dòng)子甲基化與宮頸癌腫瘤組織臨床病理進(jìn)程的相關(guān)性。其次,通過DAPI熒光核染色法觀察由SAMe處理24 h、48 h后宮頸癌細(xì)胞系 HeLa和胃癌細(xì)胞系MGC的細(xì)胞凋亡情況。最后,通過實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative reverse transcriptase-polymerase chain
3、reaction, qRT-PCR)方法和MS-HRM技術(shù)分別檢測(cè)由SAMe處理后宮頸癌細(xì)胞系HeLa和胃癌細(xì)胞系MGC中septin9-v1,v5,v mRNA表達(dá)水平以及septin9啟動(dòng)子甲基化程度。
【結(jié)果】
1.發(fā)現(xiàn)宮頸癌細(xì)胞系HeLa和胃癌細(xì)胞系MGC中存在septin9啟動(dòng)子甲基化。
2.發(fā)現(xiàn)38.5%(5∕13)的宮頸癌組織存在septin9啟動(dòng)子甲基化,但其與宮頸癌的臨床分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)
4、移、有無脈管內(nèi)癌栓以及患者年齡這些臨床病理參數(shù)之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P﹥0.05)。
3.發(fā)現(xiàn)由 SAMe處理24、48 h后宮頸癌細(xì)胞系 HeLa和胃癌細(xì)胞系 MGC出現(xiàn)凋亡。
4.與各自的對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組中宮頸癌細(xì)胞系 HeLa和胃癌細(xì)胞系 MGC中septin9-v1,v5,v的mRNA表達(dá)水平明顯降低。
5.與對(duì)照組相比,由 SAMe處理后宮頸癌細(xì)胞系 HeLa和胃癌細(xì)胞系 MGC中septi
5、n9啟動(dòng)子甲基化程度基本沒有變化。
【結(jié)論】
本研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌和胃癌中存在septin9啟動(dòng)子異常甲基化。雖然SAMe并不能使宮頸癌細(xì)胞系HeLa和胃癌細(xì)胞系MGC中septin9的甲基化位點(diǎn)發(fā)生逆轉(zhuǎn),但在其作用下septin9-v1表達(dá)水平降,并且宮頸癌細(xì)胞系和胃癌細(xì)胞系發(fā)生凋亡。表明SAMe可能通過某種途徑作用于septin9,導(dǎo)致septin9-v1 mRNA表達(dá)水平降低,阻礙了JNK信號(hào)途徑參與細(xì)胞增殖的過程
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