虎杖的抗補(bǔ)體活性成分研究.pdf

1、補(bǔ)體系統(tǒng)是體內(nèi)重要的免疫防御系統(tǒng)，參與體內(nèi)多數(shù)病理生理過(guò)程，它的正常激活對(duì)抵御外來(lái)微生物的入侵和維持機(jī)體平衡有重要作用，但其過(guò)度激活會(huì)引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、缺血再灌注、感染性休克、腎小球腎炎、急性呼吸窘迫綜合征等多種疾病。另?yè)?jù)研究表明，重癥非典型肺炎(SARS)和禽流感也與補(bǔ)體系統(tǒng)的過(guò)度激活有關(guān)。目前對(duì)此類疾病尚無(wú)理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補(bǔ)體抑制劑。前期研究發(fā)現(xiàn)，很多中藥，尤其是清熱類中藥普遍具

2、有抗補(bǔ)體活性，從中尋找天然來(lái)源的高效低毒的補(bǔ)體抑制劑對(duì)這些疾病的治療有重要意義。因此，本文對(duì)多種常用中草藥進(jìn)行了抗補(bǔ)體活性篩選并從中選取了活性較強(qiáng)的常用中藥虎杖作為研究對(duì)象，通過(guò)活性導(dǎo)向分離的方法分離鑒定了一系列的化合物，主要包括蒽醌類、萘醌類及二苯乙烯類等，對(duì)所得的化合物進(jìn)行了全面的抗補(bǔ)體活性經(jīng)典途徑和旁路途徑的測(cè)試，并進(jìn)一步對(duì)活性成分的作用靶點(diǎn)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.虎杖的抗補(bǔ)體活性及活性部位的確立

3、　　通過(guò)體外細(xì)胞溶血試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)虎杖對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑的激活有較強(qiáng)的抑制作用，CH50值為10±4μg/ml，并對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分部位萃取和活性測(cè)試，結(jié)果表明，乙酸乙酯和正丁醇部位活性均較強(qiáng)，達(dá)到10μg/ml水平，因此選取乙酸乙酯和正丁醇部位作為活性研究的對(duì)象。
　　2.乙酸乙酯部位的活性導(dǎo)向分離及化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
　　采用活性導(dǎo)向分離的方法，從虎杖的乙酸乙酯和正丁醇部位分離鑒定了21個(gè)化合物，包括蒽醌類10個(gè):大黃素甲醚

4、(7)、大黃酚(8)、大黃素-8-甲醚(9)、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷(10)、大黃素(11)、大黃酸(12)、迷人醇(13)、6-羥基蘆薈大黃素(14)、Xanthorin(15)和Isorhodoptilometrin(16);萘醌類6個(gè):6-乙?；?5，8-二羥基-2-甲氧基-7-甲基-1，4-萘醌(1)、6-乙酰基-2-乙氧基-5-羥基-7-甲基-1，4-萘醌(2)、虎杖素C(3)、3-乙酰基-5-羥基-7-甲氧基-2-

5、甲基-1，4-萘醌(4)、6-乙?；?5-羥基-2-甲氧基-7-甲基-1，4-萘醌(5)、決明松-8-O-D-葡萄糖苷(6);二苯乙烯類2個(gè):反式白藜蘆醇(17)和云杉新苷(18);及其它類化合物3個(gè):2，5-二甲基-7-羥基-色原酮(19)、7-羥基-4-甲氧基-5-甲基-香豆素(20)和5，7-二羥基-異苯并呋喃酮(21)。其中1、2、3為新化合物，結(jié)構(gòu)如下圖所示，15、16為首次從該植物中分離得到，15為首次從該植物中得到的茜草素

6、型蒽醌。
　　3.抗補(bǔ)體活性測(cè)試和活性化合物的靶點(diǎn)研究
　　采用體外細(xì)胞溶血試驗(yàn)對(duì)虎杖中分離所得的蒽醌類、萘醌類及二苯乙烯類成分進(jìn)行了系統(tǒng)的抗補(bǔ)體活性經(jīng)典途徑及旁路途經(jīng)測(cè)試。篩選結(jié)果表明，7個(gè)蒽醌類成分、萘醌類成分中的虎杖素C和2個(gè)二苯乙烯類成分對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)顯示了不同程度的抑制活性，CH50和AP50值分別為5～500和50～800μg/ml。值得一提的是其中化合物迷人醇活性強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照肝素，CH50和AP50值分別達(dá)到6±2

7、μg/ml和50±5μg/ml，有望開(kāi)發(fā)成為天然來(lái)源的新型補(bǔ)體抑制劑，為虎杖在治療補(bǔ)體過(guò)度激活相關(guān)疾病方面的新藥研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　為了更好的闡明活性成分對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)的作用機(jī)理，本實(shí)驗(yàn)選取了蒽醌類成分中活性最強(qiáng)的化合物迷人醇和唯一的蒽醌苷大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、萘醌類成分中的抗補(bǔ)體活性化合物虎杖素C及二苯乙烯類成分中的白藜蘆醇和云杉新苷進(jìn)行了抗補(bǔ)體的靶點(diǎn)研究。結(jié)果表明，迷人醇作用于補(bǔ)體系統(tǒng)的Cl q、C2、C4及C9組分