虎杖抗高尿酸血癥有效成分群的研究.pdf

1、高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導致體內尿酸過多或（和）尿酸排泄減少所引起的一組異質性疾病，可引起痛風，引發(fā)心血管疾病、代謝綜合征及慢性腎臟病等一系列危害人類身心健康的疾病。高尿酸血癥主要通過兩條途徑來控制，一是降低尿酸生成，二是促進尿酸排泄，黃嘌呤氧化酶是尿酸生成關鍵酶，能催化次黃嘌呤和黃嘌呤生成尿酸，因此是降低尿酸藥物的作用靶點，研制高效、低毒和作用機制明確的抗高尿酸血癥藥物已成為國內外研究的熱點和難點。
　　經課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，虎

2、杖提取物具有一定的抑制活性，對其物質基礎和作用機制進行研究后，首次發(fā)現(xiàn)決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可顯著地作用于黃嘌呤氧化酶靶點發(fā)揮抗高尿酸血癥作用，同時發(fā)現(xiàn)大黃素-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有潛在抑制黃嘌呤氧化酶作用，虎杖苷和白藜蘆醇通過促進尿酸排泄發(fā)揮降尿酸作用。在前期研究工作的基礎上，本研究在明確物質基礎和作用機制的基礎上制備虎杖抗高尿酸血

3、癥有效成分群，為高尿酸血癥的治療提供新思路。
　　根據(jù)新藥管理辦法的要求，需要對有效成分進行含量測定，必須有各個組分的對照品，經市場調研發(fā)現(xiàn)目前決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品是難以買到的，因此對這兩種對照品進行了制備，以用于工藝的研究和質量標準的研究。綜合運用大孔吸附樹脂柱色譜、十八烷基硅烷鍵合硅膠柱色譜、高效液相色譜及高速逆流色譜等手段從虎杖50%大孔洗脫部位制得兩個對照品，采用

4、高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）法對其進行了純度測定，經不同色譜柱和洗脫梯度檢測結果表明各對照品均為一個主色譜峰，均未出現(xiàn)異常峰；以不加校正因子的主成分自身對照法測定各對照品的純度，質量分數(shù)均大于98%，符合含量測定用對照品要求。
　　根據(jù)新藥審批管理辦法的規(guī)定，需要對原料、有效部位和制劑分別建立含量的質量標準，在中國藥典中對虎杖藥材的質量控制是對虎杖苷與大黃素的水解產物進行了測定，這一標準難以滿足虎杖有效成分群

5、新藥研發(fā)的質量控制要求，因此建立了虎杖藥材的質量標準，在建立的過程中應用了綠色溶劑聚乙二醇作為提取溶劑并對不同產地不同批次虎杖藥材中降尿酸有效成分的含量進行了測定。采用微波輔助提取法，對提取溶劑、提取溫度、提取時間、提取功率等條件對提取的影響進行了考察研究，結果表明，聚乙二醇200濃度為60%，提取溫度為80℃，提取時間為10 min，提取功率為700 W時效果最佳，并進行了線性關系、重復性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性等方法學考察，均符合要求。

6、r>　　在制備工藝的研究中已確立了抗高尿酸血癥的有效組分，為了最大限度地保留有效成分，得到雜質少且純度更高的有效成分群，對大孔樹脂分離工藝的相關參數(shù)進樣了研究。以樹脂的最大吸附量和解吸率為考察指標，對靜態(tài)吸附與解吸，動態(tài)吸附與解吸過程中的重要參數(shù)進行了研究，最終得到最佳的分離純化工藝。經研究發(fā)現(xiàn)HPD-600樹脂效果較好，其最佳的工藝條件為：裝柱體積60 mL（1 BV），虎杖樣品溶液（虎杖苷、白藜蘆醇、決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄

7、糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素的的質量濃度分別為0.7477，0.0688，0.0437，0.2763和0.1343 mg·mL-1）上樣量2 BV，上樣流速1 BV·h-1，吸附平衡后先用去離子水（4 BV）和10%乙醇（4 BV）去除部分雜質，再以1 BV·h-1的流速用90%（10 BV）的乙醇溶液進行洗脫，最終得到虎杖降尿酸有效成分群，其含量可由21.46%提高至31.34%，回收率為86.59%。應用 HP