HMCD59糖基化前后的抗補(bǔ)體活性研究.pdf

1、目的:構(gòu)建表達(dá)人突變CD59(HMCD59)蛋白的重組真核表達(dá)載體,建立HMCD59真核表達(dá)系統(tǒng),獲得表達(dá)HMCD59蛋白的中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)細(xì)胞株,深入研究HMCD59在糖尿病血管增殖癥中的作用.為闡明糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)理奠定基礎(chǔ).方法:分別構(gòu)建兩種含有HMCD59全長CDNA序列的重組pALTER質(zhì)粒,并與pcDNA3質(zhì)粒,按3:1比例混合后,運(yùn)用脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞(編號(hào)為HM5-CHO及HM6-CHO),用

2、新霉素類似物G41 8初步篩選出陽性克隆.應(yīng)用熒光抗體技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、免疫酶標(biāo)技術(shù)、western-blot技術(shù)進(jìn)一步檢測HMCD59蛋白在真核細(xì)胞膜表面的表達(dá);收集CHO細(xì)胞作為抗原,免疫家兔以獲得多克隆抗體,并通過BCECF染料釋放試驗(yàn)檢測HMCD59蛋白糖化前后的抗補(bǔ)體活性.結(jié)論:建立了兩個(gè)表達(dá)HMCD59的真核表達(dá)系統(tǒng),獲得表達(dá)HMCD59的細(xì)胞株.獲得了抗CHO細(xì)胞的高效價(jià)多克隆抗體.初步研究了HMCD59的活性,發(fā)現(xiàn)HMC