2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  PDZ結(jié)合激酶(PDZ-binding kinase,PBK)又稱為T型淋巴因子激活的殺傷細胞起源蛋白激酶(T-lymphokine-activated killer cell-originated protein kinase,TOPK)是由322個氨基酸組成的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,該蛋白在正常組織中除睪丸和一些胚胎組織外,在其它正常組織中均難以檢測到其表達,然而在多種腫瘤組織中呈高表達狀態(tài),與惡性腫瘤的增殖調(diào)控密

2、切相關(guān)。本論文重點探討PBK/TOPK對乳腺癌細胞增殖作用的影響及其分子機制。
  方法:
  1、采用他汀類藥物阿托伐他汀鈣(atorvastatin calcium,AT)和香葉基香葉醇(geranylgeraniol,GGOH)分別處理ER陰性(ER-)的MDA-MB-231和ER陽性(ER+)的MCF7乳腺癌細胞,觀察AT和GGOH對乳腺癌細胞生長增殖的作用。
  2、RT-PCR和Western blot分別

3、檢測AT和GGOH處理MDA-MB-231和MCF7乳腺癌細胞后PBK mRNA和蛋白的表達水平;細胞免疫熒光檢測AT處理后,PBK在這些細胞中的表達和分布。
  3、Western blot檢測香葉酰香葉酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰ抑制劑298(geranylgeranyltrans feraseⅠ inhibitor-298, GGTI-298)處理MDA-MB-231和MCF7乳腺癌細胞后PBK蛋白的表達水平。
  4、采用細胞免疫熒光

4、檢測AT和GGTI-298處理MDA-MB-231乳腺癌細胞后YAP(Yes-associated protein)在細胞中的表達和定位。
  5、采用實時定量PCR技術(shù)(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和Western blot方法分別檢測低表達YAP的MDA-MB-231乳腺癌細胞中PBK mRNA水平和蛋白表達的變化。
  6、采用RNA干擾技術(shù)(RNA interference,

5、RNAi),獲得低表達PBK的MDA-MB-231乳腺癌細胞株,并觀察細胞的生長增殖情況;采用PBK激酶特異性抑制劑HI-TOPK-032處理MDA-MB-231乳腺癌細胞,觀察細胞的生長增殖情況。
  結(jié)果:
  1、AT(10μM)能顯著誘導MDA-MB-231細胞凋亡,GGOH(10μM)可解救AT對MDA-MB-231細胞的毒性作用,和對照組比較差異明顯(P<0.05)。而AT(20μM)對MCF7細胞的生長增殖沒有

6、顯著影響。
  2、AT(10μM)處理MDA-MB-231細胞后,PBK在細胞中的表達水平降低,而在MCF7乳腺癌細胞中無明顯變化,加入GGOH(10μM)能夠恢復MDA-MB-231細胞中PBK的表達。
  3、GGTI-298(5μM)處理MDA-MB-231細胞后,PBK的表達明顯下調(diào),而MCF7細胞中PBK的表達沒有顯著變化。
  4、AT或GGTI-298處理MDA-MB-231乳腺癌細胞后YAP在細胞核中

7、的定位受到抑制。
  5、在低表達YAP的MDA-MB-231細胞中不論是在mRNA水平還是蛋白水平,PBK都顯著下調(diào)。
  6、PBK敲低或抑制后,MDA-MB-231乳腺癌細胞的增殖被顯著抑制。
  結(jié)論:
  1、AT和GGTI-298均能顯著降低ER-的乳腺癌細胞MDA-MB-231的增殖和下調(diào)PBK的表達。但對ER+的MCF7細胞無明顯影響。
  2、低表達YAP的MDA-MB-231細胞其PBK

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