TGF-β-,1-及其信號(hào)蛋白SMAD-,3-與大鼠心肌細(xì)胞肥大關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分大鼠心肌肥厚模型中TGF-β1和Smad3的表達(dá);目的:復(fù)制大鼠心肌肥厚模型,研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β<,1>及其信號(hào)蛋白Smad3在大鼠肥厚心肌中的表達(dá)情況.方法:雄性SD大鼠50只,由不同檢測(cè)時(shí)間隨機(jī)分為5組(對(duì)照組,術(shù)后3天組、7天組、14天組、28天組.每組10只).結(jié)扎大鼠腹主動(dòng)脈復(fù)制心肌肥厚模型,檢測(cè)術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠左心室重量指數(shù)(1eft ventricular mass index,LVMI),RT-PCR

2、法檢測(cè)肥厚左室心肌組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β<,1>,TGF-β<,1>)mRNA以及Smad3mRNA的表達(dá).Western blotting、免疫組化法檢測(cè)肥厚左室心肌組織中Smad3蛋白的表達(dá).第二部分TGF-β<,1>對(duì)大鼠心肌細(xì)胞肥大的作用;目的:探討轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β<,1>(TGF-β<,1>)與大鼠心肌細(xì)胞肥大的關(guān)系.方法:應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞,隨機(jī)分為A

3、、B兩大組.A大組內(nèi)再分對(duì)照組,不同濃度的TGF-β<,1>(1、3、10ng/m1)組,AngⅡ(10ug/ml)組,TGF-β<,1>(3ng/ml)+AngⅡ(10ug/m1)組共6小組.每組刺激時(shí)間均為48h,每小組各4例.B大組內(nèi)再分對(duì)照組,AngⅡ(10ug/ml)不同刺激時(shí)間(6h,12h,24h)組共4小組,每小組各4例.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)A大組中各小組心肌細(xì)胞的總蛋白含量,RT-PCR法測(cè)定A大組中各小組心肌細(xì)胞胚胎抗

4、原ANFmRNA的表達(dá).RT-PCR法分析B大組中各小組心肌細(xì)胞TGF-β<,1>mRNA的表達(dá).第三部分Smad3在TGF-β<,1>介導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大中的作用;目的:探討信號(hào)蛋白Smad3在TGF-β<,1>介導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大的作用.方法:應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞,細(xì)胞隨機(jī)分為6組:對(duì)照組,TGF-β<,1>3ng/ml作用時(shí)間15min組,30min組,1h組,4h組,8h組,每組各4例.在TGF-β<,1>作用不

5、同時(shí)間后,RT-PCR法測(cè)定各時(shí)間組心肌細(xì)胞Smad3mRNA的表達(dá).Western blotting法分析各時(shí)間組心肌細(xì)胞Smad3蛋白的表達(dá).第四部分Smad3基因反義寡核苷酸對(duì)TGF-β<,1>介導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大影響;目的:探討Smad3基因反義寡核苷酸對(duì)TGF-β<,1>介導(dǎo)大鼠心肌細(xì)胞肥大的影響,并研究其作用機(jī)制.方法:應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)新生大鼠心肌細(xì)胞,將其隨機(jī)分為6組:對(duì)照組,脂質(zhì)體組,脂質(zhì)體+S-ODN組,脂質(zhì)體+A