靶向干擾血管生長因子的樹突狀細胞疫苗對膀胱癌T24細胞影響的實驗研究.pdf

1、中圖分類號：中圖分類號：R69；R737.14碩士學(xué)位論文靶向干擾血管生長因子的樹突狀細胞疫苗對膀胱癌T24細胞影響的實驗研究院（系）、所院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名刁思軍學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)外科學(xué)導(dǎo)師姓名導(dǎo)師姓名王亮主任醫(yī)師主任醫(yī)師二〇一七年四月二〇一七年四月靶向干擾血管生長因子的樹突狀細胞疫苗對膀靶向干擾血管生長因子的樹突狀細胞疫苗對膀胱癌胱癌T24T24細胞影響的實驗研究細胞影響的實驗研究中文中文摘要摘要目的目的：利

2、用RNA干擾（RNAinterference，RNAi）技術(shù)，靶向下調(diào)膀胱癌T24細胞的VEGF（vularendothelialgrowthfactVEGF）表達，觀察下調(diào)膀胱癌T24細胞VEGF表達后對外周血來源的DC(dendriticcellDC)前體細胞分化成熟的影響。利用膀胱癌T24細胞的全抗原制備DC疫苗進行體外細胞實驗研究，觀察下調(diào)VEGF后的DC疫苗介導(dǎo)的特異性T淋巴細胞對膀胱癌T24細胞的殺傷作用。方法：方法：利用R

3、NAi技術(shù)，以慢病毒為載體，構(gòu)建LVVEGFARNAi，轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細胞，下調(diào)膀胱癌T24細胞的VEGF表達。轉(zhuǎn)染實驗分為3組：轉(zhuǎn)染組（LVVEGF）、陰性轉(zhuǎn)染組（LVCO）及未轉(zhuǎn)染組（CO）。用倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀察各組細胞生長及熒光表達情況。利用qRTPCR以及ELISA檢測各組膀胱癌T24細胞VEGF的mRNA和蛋白表達水平。制備三組DC疫苗：對照組（常規(guī)完全培養(yǎng)液）、干擾組（25%體積分數(shù)的轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)上清）以及未干擾組（

4、25%體積分數(shù)的未轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)上清）。在體外利用rhIL4(recombinanthumaninterleukin4rhIL4)rhGMCSF(recombinanthumangranulocytemacrophagecolonystimulatingfactrhGMCSF)誘導(dǎo)DC分化第8天各組加入膀胱癌T24細胞全抗原，2h后加入LPS（LipopolysacidesLPS）刺激DC成熟。繼續(xù)培養(yǎng)至第14天，通過倒置顯微鏡觀察DC形態(tài)