靶向干擾血管生長(zhǎng)因子的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中圖分類號(hào)：中圖分類號(hào)：R69；R737.14碩士學(xué)位論文靶向干擾血管生長(zhǎng)因子的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究院（系）、所院（系）、所臨床醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名刁思軍學(xué)科、專業(yè)學(xué)科、專業(yè)外科學(xué)導(dǎo)師姓名導(dǎo)師姓名王亮主任醫(yī)師主任醫(yī)師二〇一七年四月二〇一七年四月靶向干擾血管生長(zhǎng)因子的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)膀靶向干擾血管生長(zhǎng)因子的樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗對(duì)膀胱癌胱癌T24T24細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究中文中文摘要摘要目的目的：利

2、用RNA干擾（RNAinterference，RNAi）技術(shù)，靶向下調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞的VEGF（vularendothelialgrowthfactVEGF）表達(dá)，觀察下調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞VEGF表達(dá)后對(duì)外周血來(lái)源的DC(dendriticcellDC)前體細(xì)胞分化成熟的影響。利用膀胱癌T24細(xì)胞的全抗原制備DC疫苗進(jìn)行體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究，觀察下調(diào)VEGF后的DC疫苗介導(dǎo)的特異性T淋巴細(xì)胞對(duì)膀胱癌T24細(xì)胞的殺傷作用。方法：方法：利用R

3、NAi技術(shù)，以慢病毒為載體，構(gòu)建LVVEGFARNAi，轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細(xì)胞，下調(diào)膀胱癌T24細(xì)胞的VEGF表達(dá)。轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)分為3組：轉(zhuǎn)染組（LVVEGF）、陰性轉(zhuǎn)染組（LVCO）及未轉(zhuǎn)染組（CO）。用倒置顯微鏡及熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞生長(zhǎng)及熒光表達(dá)情況。利用qRTPCR以及ELISA檢測(cè)各組膀胱癌T24細(xì)胞VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)水平。制備三組DC疫苗：對(duì)照組（常規(guī)完全培養(yǎng)液）、干擾組（25%體積分?jǐn)?shù)的轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)上清）以及未干擾組（

4、25%體積分?jǐn)?shù)的未轉(zhuǎn)染組培養(yǎng)上清）。在體外利用rhIL4(recombinanthumaninterleukin4rhIL4)rhGMCSF(recombinanthumangranulocytemacrophagecolonystimulatingfactrhGMCSF)誘導(dǎo)DC分化第8天各組加入膀胱癌T24細(xì)胞全抗原，2h后加入LPS（LipopolysacidesLPS）刺激DC成熟。繼續(xù)培養(yǎng)至第14天，通過(guò)倒置顯微鏡觀察DC形態(tài)